提取植物dna方法方法(植物DNA提取的原理和方法是什么)

1.植物DNA提取的原理和方法是什么

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DNA提取方法簡介DNA提取的幾種方法基因組DNA的提取CTAB法SDS法其它DNA提取的幾種方法非基因組DNA的提取質粒DNA的提取?堿裂解法?煮沸法線粒體、葉綠體DNA的提取?差速離心結合SDS裂解法基因組DNA-CTAB法CTAB法原理（植物DNA提取經典方法）CTAB(，十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽離子去污劑，可溶解細胞膜，并與核酸形成復合物。具有從低離子強度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在這種條件下，蛋白質和中性多聚糖仍留在溶液里該復合物在高鹽溶液中（>0.7mol/LNaCl）是可溶的，通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。植物材料之前必須預熱，且離心時溫度不要低于15℃。注：CTAB溶液在低于15℃時會形成沉淀析出，因此在將其加入冰冷的基因組DNA-CTAB法CTAB提取緩沖液的經典配方組份終濃度Tris-HClEDTANaCl(pH8.0)(pH8.0)100mM20mM1.4MCTAB2%(W/V)β-巰基乙醇0.1%(V/V)使用前加入Tris-HCl(pH8.0)提供一個緩沖環(huán)境，防止核酸被破壞；EDTA螯合Mg2+或Mn2+離子，抑制DNase活性；NaCl提供一個高鹽環(huán)境，使DNP（脫氧核糖核蛋白）。CTAB溶解細胞膜，并結合核酸，使核酸便于分離；β-巰基乙醇是抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除基因組DNA-CT

2.提取DNA的方法有哪些

DNA提取的幾種方法

(1).濃鹽法

利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質，此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.

也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白.

兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些.

以稀鹽酸溶液提取DNA 時，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質與DNA 的分離.在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA.

(2).陰離子去污劑法：

用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合，因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA.

(3).苯酚抽提法：

苯酚作為蛋白變性劑，同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與DNA 聯結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.離心分層后取出水層，多次重復操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質，用乙醇沉淀DNA .此時DNA是十分粘稠的物質，可用玻璃漫漫繞成一團，取出.此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .

( 4).水抽提法：

利用核酸溶解于水的性質，將組織細胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過程中加入SDS.

3.植物DNA提取的原理和方法是什么

原理就是去掉植物細胞壁 細胞膜 質體 線粒體 葉綠體 剩下細胞核了。就是DNA了。

通常采用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞，由于植物細胞勻漿含有多種酶類（尤其是氧化酶類）對DNA的抽提產生不利的影響，在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑（如巰基乙醇）以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并減少研磨過程中各種酶類的作用。

十二烷基肌酸鈉（sarkosyl）、十六烷基三甲基溴化銨（hexadyltrimethyl ammomum bromide，簡稱為CTAB）、十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，簡稱SDS）等離子型表面活性劑，能溶解細胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，從而使DNA得以游離出來。再加入苯酚和氯仿等有機溶劑，能使蛋白質變性，并使抽提液分相，因核酸（DNA、RNA）水溶性很強，經離心后即可從抽提液中除去細胞碎片和大部分蛋白質。上清液中加入無水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物總DNA溶液

4.植物組織中DNA用什么方法提取與測定

脫氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid,DNA）是一切生物細胞的重要組成成分，主要存在于細胞核中，鹽溶法是提取DNA的常規(guī)技術之一。從細胞中分離得到的DNA是與蛋白質結合的DNA，其中還含有大量RNA，即核糖核蛋白。如何有效地將這兩種核蛋白分開是技術的關鍵。DNA不溶于0.14mol/L 的NaCl溶液中，而RNA則能溶于0.14mol/L 的NaCl溶液之中，利用這一性質就可以將二者從破碎細胞漿液中分開。制備過程中，細胞破碎的同時就有Dnase釋放到提取液中，使DNA因被降解而影響得率，在提取緩沖液中加入適量的檸檬酸鹽和EDTA，既可抑制酶的活性又可使蛋白質變性而與核酸分離，再加入陰離子去垢劑0.15%的SDS，經過2h攪拌，或用氯仿-異醇除去蛋白，通過離心使蛋白質沉淀而除去，得到的是含有核酸的上清液。然后用95%的預冷乙醇即可把DNA從除去蛋白質的提取液中沉淀出來。

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