微生物顯微觀察時(shí)制片方法(怎么制作微生物的制片,然后用顯微鏡觀察)

1.怎么制作微生物的制片,然后用顯微鏡觀察

(1) 以油性簽字筆在載玻片之背面畫個(gè)圈 并寫上所要鑒定之細(xì)菌的名稱。

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(2) 在圓圈正面滴上一滴水，水滴越小滴越好，如有需要，可將多馀的水

擦去。

(3) 用牙簽沾取一點(diǎn)菌落涂于載玻片正面的圓圈中（勿沾取太多的細(xì)菌）。

(4) 待涂布的菌液完全風(fēng)乾后（切記不可用火燒乾，以免破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的

結(jié)構(gòu)），讓載玻片在火上來回?cái)?shù)次，使細(xì)菌固定（每次通過火焰后均需

稍冷卻，載玻片之溫度以不燙手為原則）。

一）正置顯微鏡

1、安放

右手握住鏡臂，左手托住鏡座，使鏡體保持直立。桌面要清潔、平穩(wěn)，要選擇臨窗或光線充足的地方。單筒的一般放在左側(cè)，距離桌邊3~4厘米處。

2、清潔

檢查顯微鏡是否有毛病，是否清潔，鏡身機(jī)械部分可用干凈軟布擦拭。透鏡要用擦鏡紙擦拭，如有膠或粘污，可用少量二甲苯清潔之。

3、對(duì)光

鏡筒升至距載物臺(tái)1~2厘米處，低倍鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔。調(diào)節(jié)光圈和反光鏡，光線強(qiáng)時(shí)用平面鏡，光線弱時(shí)用凹面鏡，反光鏡要用雙手轉(zhuǎn)動(dòng)。

若使用的為帶有光源的顯微鏡，可省去次步驟，但需要調(diào)節(jié)光亮度的旋鈕。

4、安裝標(biāo)本

將玻片放在載物臺(tái)上，注意有蓋玻片的一面一定朝上。用彈簧夾將玻片固定，轉(zhuǎn)動(dòng)平臺(tái)移動(dòng)器的旋鈕，使要觀察的材料對(duì)準(zhǔn)通光孔中央。

5、調(diào)焦

調(diào)焦時(shí)，先旋轉(zhuǎn)粗調(diào)焦旋鈕慢慢降低鏡筒，并從側(cè)面仔細(xì)觀察，直到物鏡貼近玻片標(biāo)本，然后左眼自目鏡觀察，左手旋轉(zhuǎn)粗調(diào)焦旋鈕抬升鏡筒，直到看清標(biāo)本物像時(shí)停止，再用細(xì)調(diào)焦旋鈕回調(diào)清晰。

操作注意：不應(yīng)在高倍鏡下直接調(diào)焦；鏡筒下降時(shí)，應(yīng)從側(cè)面觀察鏡筒和標(biāo)本間的間距；要了解物距的臨界值。

若使用雙筒顯微鏡，如觀察者雙眼視度有差異，可靠視度調(diào)節(jié)圈調(diào)節(jié)。另外雙筒可相對(duì)平移以適應(yīng)操作者兩眼間距。

6、觀察

若使用單筒顯微鏡，兩眼自然張開，左眼觀察標(biāo)本，右眼觀察記錄及繪圖，同時(shí)左手調(diào)節(jié)焦距，使物象清晰并移動(dòng)標(biāo)本視野。右手記錄、繪圖。

鏡檢時(shí)應(yīng)將標(biāo)本按一定方向移動(dòng)視野，直至整個(gè)標(biāo)本觀察完畢，以便不漏檢，不重復(fù)。

光強(qiáng)的調(diào)節(jié)：一般情況下，染色標(biāo)本光線宜強(qiáng)，無色或未染色標(biāo)本光線宜弱；低倍鏡觀察光線宜弱，高倍鏡觀察光線宜強(qiáng)。除調(diào)節(jié)反光鏡或光源燈以外，虹彩光圈的調(diào)節(jié)也十分重要。

(1)低倍鏡觀察

觀察任何標(biāo)本時(shí)，都必須先使用低倍鏡，因?yàn)槠湟曇按?，易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)和確定要觀察的部位。

(2)高倍鏡觀察

從低倍鏡轉(zhuǎn)至高倍時(shí)，只需略微調(diào)動(dòng)細(xì)調(diào)焦旋鈕，即可使物像清晰。

使用高倍鏡時(shí)切勿使用粗調(diào)焦旋鈕，否則易壓碎蓋玻片并損傷鏡頭。

轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器時(shí)，不可用手指直接推轉(zhuǎn)物鏡，這樣容易使物鏡的光軸發(fā)生偏斜，轉(zhuǎn)換器螺紋受力不均勻而破壞，最后導(dǎo)致轉(zhuǎn)換器就會(huì)報(bào)廢。

(3)油鏡的觀察

先用低倍鏡及高倍鏡將被檢物體移至視野中央后，再換油鏡觀察。油鏡觀察前，應(yīng)將顯微鏡亮度調(diào)整至最亮，光圈完全打開。

使用油鏡時(shí)，先在蓋玻片上滴加一滴香柏油（鏡油），然后降低鏡筒并從側(cè)面仔細(xì)觀察，直到油鏡浸入香柏油并貼近玻片標(biāo)本，然后用目鏡觀察，并用細(xì)調(diào)焦旋鈕抬升鏡筒，直到看清標(biāo)本的焦段時(shí)停止并調(diào)節(jié)清晰。

香柏油滴加要適量。油鏡使用完畢后一定要用擦鏡紙沾取二甲苯擦去香柏油，并再用干的擦鏡紙擦去多余二甲苯。

7、結(jié)束操作

觀察完畢，移去樣品，扭轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，使鏡頭V字型偏于兩旁，反光鏡要豎立，降下鏡筒，擦抹干凈，并套上鏡套。

若使用的是帶有光源的顯微鏡，需要調(diào)節(jié)亮度旋鈕將光亮度調(diào)至最暗，再關(guān)閉電源按鈕，以防止下次開機(jī)時(shí)瞬間過強(qiáng)電流燒壞光源燈

2.敘述細(xì)菌,放線菌,酵母菌,霉菌的光學(xué)顯微鏡制片方法

一、細(xì)菌制片及簡(jiǎn)單染色：

1、涂片

取潔凈的載玻片1張，將其在火焰上微微加熱，除去上面的油脂，冷卻，在中央部位滴加一滴無菌水，用接種環(huán)在火焰旁從培養(yǎng)基上挑取少量菌體與水混合。用接種環(huán)將菌體涂成直徑約1cm的均勻薄層。注意，取菌量不宜過大，一面造成軍體重疊。

2、干燥

放在桌面上，待其自然干燥。

3、固定

將已干燥的涂片標(biāo)本向上，在火焰上通過3-4次固定。其目的是殺死細(xì)菌；使菌體蛋白質(zhì)凝固，菌體牢固粘附于載玻片上，染色時(shí)不被染液或水沖掉；增加菌體對(duì)染料的結(jié)合力，使圖片易著色。

4、染色

在涂片上滴加染料1-2滴，使其布滿涂菌部分，染色1分鐘。

5、沖洗

斜置玻片，傾去染液。用水輕輕沖去染液，至流水變清。注意水流不能直接沖洗涂菌處，以免將涂菌沖洗掉。

6、吸干

用吸水紙輕輕吸去玻片上的水分，干燥后鏡檢。

二、酵母菌制片及簡(jiǎn)單染色。

水—碘液浸片法。將革蘭氏染色用碘液用水稀釋4倍后，滴加一滴于載破片中央，無菌操

作取少許菌體置于染色中混勻，蓋上破片后鏡劍。

三、放線菌制片方法（插片法）

1、在馬鈴薯浸汁瓊脂培養(yǎng)基平板上，劃線接入少量放線菌的孢子，在接種線旁傾斜地插入無菌蓋玻片，于28-30℃培養(yǎng)。

2、培養(yǎng)3~4天后，菌絲沿著蓋玻片向上生長(zhǎng)，待菌絲長(zhǎng)好后，取出蓋玻片放在干凈的載玻片上，置于顯微鏡下觀察。

四、霉菌制片法

水浸制片法：

1、在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液或蒸餾水。

2、用解剖針從生長(zhǎng)有霉菌的斜面挑取少量帶有孢子的霉菌菌絲，用50%的乙醇浸潤(rùn)，再用蒸餾水將浸過的菌絲洗一下，然后放入載玻片上的液滴中，仔細(xì)地用解剖針將菌絲分散開來。（也可省略酒精和水浸潤(rùn)，洗滌）

3、注意取菌時(shí)，毛霉和根霉用解剖針挑取少量菌絲即可，青霉和黑曲霉和培養(yǎng)基結(jié)合緊密，不易挑取，可連培養(yǎng)基一起挑取，再在染液中分離菌絲。青霉和曲霉的培養(yǎng)時(shí)間不宜過長(zhǎng)，一般為2-2.5天，以免菌絲與培養(yǎng)基不好剝離。

4、蓋上蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡，且不要再移動(dòng)蓋玻片）。（黑曲霉不易觀察到足細(xì)胞）

5、鏡檢：先用低倍鏡，必要時(shí)轉(zhuǎn)換高倍鏡鏡檢并記錄觀察結(jié)果。

3.觀察微生物時(shí)使用顯微鏡的正確步驟

一、安放 1.右手握住鏡臂，左手托住鏡座。

2.把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，略偏左（顯微鏡放在距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。

二、對(duì)光 3.轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔（物鏡的前端與載物臺(tái)要保持2厘 米的距離）。 4.把一個(gè)較大的光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔。

左眼注視目鏡內(nèi)（右眼睜開，同時(shí)畫圖）。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。

通過目鏡，可以看到白亮的視野。 三、觀察 5.把所要觀察的玻片標(biāo)本放在載物臺(tái)上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對(duì)通光孔的中心。

6.轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標(biāo)本）。 7.左眼向目鏡內(nèi)看，同時(shí)逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。

再略微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 四、清潔收鏡 把顯微鏡的外表擦拭干凈。

轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，把兩個(gè)物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，送回原處。

ok了吧。

4.用顯微鏡觀察細(xì)菌的步驟

一、用臟手上的細(xì)菌制裝片：

1、收集手上細(xì)菌，用少量無菌水（可用冷開水代替）沖洗臟手，讓洗手的水流到培養(yǎng)皿中。這些臟水就是細(xì)菌培養(yǎng)液。

2、制取細(xì)菌裝片，取甲、乙兩塊潔凈的載玻片，分別在兩玻片的中央各滴一小滴細(xì)菌培養(yǎng)液；然后在甲片上蓋好蓋玻片后直接用600倍的顯微鏡觀察。

（用稍偏暗的視野，調(diào)節(jié)到位可以看到多種細(xì)菌和其它微生物。很容易看到活動(dòng)的微生物，這樣對(duì)兒童更有吸引力和教育意義。）如果你想進(jìn)一步放大并會(huì)操作，選定觀察的物象后，可把此物象移到視野正中央，再轉(zhuǎn)換更高倍數(shù)的鏡頭觀察即可。

3、在乙片的細(xì)菌培養(yǎng)液滴上滴一小滴龍膽紫染色液，用牙簽將細(xì)菌培養(yǎng)液和龍膽紫液攪勻、并將液滴推開，再用酒精燈加熱液滴（約5秒鐘）后讓它自然晾干（約5分鐘）。

再用600倍的顯微鏡直接觀察，既可以看到染成深藍(lán)色的多種細(xì)菌和其它微生物。不過此時(shí)看到的微生物都已死亡、并被固定，因此看不到它們的活動(dòng)狀態(tài)。

二、制取洗手后的對(duì)照裝片。

1、洗手-----將手用香皂洗干凈，用潔凈的干毛巾揩干手；

2、收集細(xì)菌培養(yǎng)液-------用少量無菌水沖洗雙手，讓洗手液流入潔凈的培養(yǎng)皿中；

3、制細(xì)菌裝片-----制片過程與以上裝片過程相同，參照制片即可。

擴(kuò)展資料：

細(xì)菌的基本形態(tài)與大小

(1)球菌：

球菌是外形呈圓球形或橢圓形的細(xì)菌，直徑0.5~1微米，有以下幾種類型：

①單球菌：?jiǎn)为?dú)存在，如尿素小球菌；②雙球菌：如肺炎雙球菌；

③鏈球菌：如乳酸鏈球菌；④四聯(lián)球菌：形成的4個(gè)細(xì)胞排列在一起，成田字，如四聯(lián)球菌；

⑤八疊球菌：如尿素生孢八疊球菌；⑥葡萄球菌：如金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）。

(2)桿菌：

外形為桿狀的細(xì)菌稱桿菌，常有長(zhǎng)寬接近的短桿或球桿狀菌，如甲烷短桿菌屬（Methano—brevibacter）;

長(zhǎng)寬相差較大的棒桿狀或長(zhǎng)桿狀菌，如枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）、梭狀桿菌（Bacteriumfusiformis）;

分枝狀或叉狀菌，如雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）；竹節(jié)狀（兩端平截），如炭疽芽孢桿菌（Bacillusanthracis）等。

按桿菌細(xì)胞的排列方式不同則有成對(duì)的雙桿菌、呈鏈狀的鏈桿菌，另外，常有柵狀、“八”字狀以及由鞘衣包裹在一起的絲狀等多種。典型的桿菌有大腸桿菌、枯草桿菌、鏈桿菌、變形桿菌[2]。

(3)螺旋狀：

螺旋狀的細(xì)菌稱螺旋菌，一般長(zhǎng)5~50微米，寬0.5~5微米，根據(jù)菌體的彎曲可分為：

①弧菌（Vibrio）：螺旋不足一環(huán)者呈香蕉狀或逗點(diǎn)狀，如霍亂弧菌（Vibriocholerae）；②螺菌（Spirillum）：滿2~6環(huán)的小型、堅(jiān)硬的螺旋狀細(xì)菌，如小螺菌（Spirillumminor）;

③螺旋體（Spirochaeta）：旋轉(zhuǎn)周數(shù)多（通常超過6環(huán)）、體長(zhǎng)而柔軟的螺旋狀細(xì)菌，如梅毒螺旋體（TreponemaPallidum）。

參考資料來源：百度百科-細(xì)菌

5.制作細(xì)菌標(biāo)本片是由哪幾個(gè)步驟

制作微生物玻片標(biāo)本通常采用涂片法，微生物包括細(xì)菌和真菌（或包括病毒），細(xì)菌個(gè)體小，通常用涂片法制作玻片標(biāo)本。涂片法是裝片法制作玻片標(biāo)本的一種方法。制作方法是，細(xì)菌可以用細(xì)菌液直接涂布在載玻片上，蓋上蓋片直接觀察或干燥后染色觀察，染色觀察通常需要洗去染色液后觀察。制作真菌標(biāo)本可以采用涂片法、撕片法、貼片法和切片法，單細(xì)胞或孢子或菌絲采用涂片法，大型真菌有較大的組織塊，可以采用撕片法（如撕取一部分蘑菇絲）、貼片法（將蘑菇的菌褶貼到載片上）和切片法（切片的方式觀察蘑菇的結(jié)構(gòu)）。

制作植物玻片標(biāo)本方法很多，根據(jù)材料不同和觀察目的不同采用不同方法。涂片法（觀察果實(shí)營(yíng)養(yǎng)組織，如西瓜瓤）、撕片法（觀察洋蔥表皮、觀察導(dǎo)管）、切片法（觀察組織、器官結(jié)構(gòu)）、磨片法（堅(jiān)硬的果核磨成薄片觀察）。

切片法分為徒手切片、冰凍切片和石蠟切片等方法。

6.生物顯微鏡的幾種觀察方法都有什么作用

一.相差鏡檢法（Phasecontrast） 在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過程中，相差鏡檢術(shù)的發(fā)明成功，是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就.我們知道，人眼只能區(qū)分光波的波長(zhǎng)（顏色）和振幅（亮度），對(duì)于無色通明的生物標(biāo)本，當(dāng)光線通過時(shí)，波長(zhǎng)和振幅變化不大，在明場(chǎng)觀察時(shí)很難觀察到標(biāo)本. 相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進(jìn)行鏡檢，也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)象，將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词故菬o色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見.這大大便利了活體細(xì)胞的觀察，因此相差鏡檢法廣泛應(yīng)用于倒置顯微鏡. 相差顯微鏡的基本原理是，把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見.光線透過標(biāo)本后發(fā)生折射，偏離了原來的光路，同時(shí)被延遲了1/4λ（波長(zhǎng)），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變?yōu)?/2λ，兩束光合軸后干涉加強(qiáng)，振幅增大或減下，提高反差.在構(gòu)造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處： 1.環(huán)形光闌（annulardiaphragm）位于光源與聚光器之間，作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標(biāo)本上. 2.相位板（annularphaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ.分為兩種： 1.A+相板：將直射光推遲1/4λ，兩組光波合軸后光波相加，振幅加大，標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮，形成亮反差（或稱負(fù)反差）. 2.B+相板：將衍射光推遲1/4λ，兩組光線合軸后光波相減，振幅變小，形成暗反差（或稱正反差），結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗 二.暗視野觀察（Darkfield） 暗視野實(shí)際是暗場(chǎng)照明發(fā).它的特點(diǎn)和明視野不同，不直接觀察到照明的光線，而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線.因此，視場(chǎng)成為黑暗的背景，而被檢物體則呈現(xiàn)明亮的象. 暗視野的原理是根據(jù)光學(xué)上的丁道爾現(xiàn)象，微塵在強(qiáng)光直射通過的情況下，人眼不能觀察，這是因?yàn)閺?qiáng)光繞射造成的.若把光線斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了體積，為人眼可見. m..m暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡.它的特點(diǎn)是不讓光束由下至上的通過被檢物體，而是將光線改變途徑，使其斜射向被檢物體，使照明光線不直接進(jìn)入物鏡，利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖象.暗視野觀察的分辨率遠(yuǎn)高于明視野觀察，最高達(dá)0.02—0.004 三.明視野觀察（Brightfield） 明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式，廣泛應(yīng)用于病理、檢驗(yàn)，用于觀察被染色的切片，所有顯微鏡均能完成此功能. 四.偏光顯微鏡（Polarizingmicroscope） 偏光顯微鏡的特點(diǎn) 偏光顯微鏡是鑒定物質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡.凡具有雙折射的物質(zhì)，在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚，當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色發(fā)來進(jìn)行觀察，但有些則不可能，而必須利用偏光顯微鏡. 偏光顯微鏡的特點(diǎn)，就是將普通改變?yōu)槠膺M(jìn)行鏡檢的方法，以鑒別某一物質(zhì)是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）. 雙折射性是晶體的基本特性.因此，偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物，化學(xué)等領(lǐng)域.在生物學(xué)和植物學(xué)也有應(yīng)用. 五.微分干涉稱鏡檢術(shù)（） 微分干涉鏡檢術(shù)出現(xiàn)于60年代，它不僅能觀察無色透明的物體，而且圖象呈現(xiàn)出浮雕壯的立體感，并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達(dá)到的某些優(yōu)點(diǎn)，觀察效果更為逼真. 原理； 微分干涉稱鏡檢術(shù)是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來分解光束.分裂出來的光束的振動(dòng)方向相互垂直且強(qiáng)度相等，光束分別在距離很近的兩點(diǎn)上通過被檢物體，在相位上略有差別.由于兩光束的裂距極小，而不出現(xiàn)重影現(xiàn)象，使圖象呈現(xiàn)出立體的三維感覺. DIC顯微鏡的物理原理完全不同于相差顯微鏡，技術(shù)設(shè)計(jì)要復(fù)雜得多.DIC利用的是偏振光，有四個(gè)特殊的光學(xué)組件：偏振器（polarizer）、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器（analyzer）.偏振器直接裝在聚光系統(tǒng)的前面，使光線發(fā)生線性偏振.在聚光器中則安裝了偌瑪斯斯棱鏡，即DIC棱鏡，此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光（x和y），二者成一小夾角.聚光器將兩束光調(diào)整成與顯微鏡光軸平行的方向.最初兩束光相位一致，在穿過標(biāo)本相鄰的區(qū)域后，由于標(biāo)本的厚度和折射率不同，引起了兩束光發(fā)生了光程差.在物鏡的后焦面處安裝了第二個(gè)偌瑪斯斯棱鏡，即DIC滑行器，它把兩束光波合并成一束. 這時(shí)兩束光。