去除樣品中蛋白質(zhì)的方法(生物樣品中蛋白質(zhì)的處理方法)

1.生物樣品中蛋白質(zhì)的處理方法有哪些

一。

蛋白質(zhì)沉淀方法 1.中性鹽鹽析法 ⑴在一定的 pH值及溫度條件下，改變鹽的濃度（即離子強(qiáng)度）達(dá)到沉淀的目的，稱為“Ks”分級(jí)鹽析法。 （Ks鹽析：固定pH， 溫度，改變鹽濃度） ⑵在一定的離子強(qiáng)度下，改變?nèi)芤旱膒H值及溫度，達(dá)到沉淀的目的，稱為“β”分級(jí)鹽析法。

（β鹽析：固定離子強(qiáng)度，改變pH及溫度。） 2.等電點(diǎn)沉淀法 蛋白質(zhì)等電點(diǎn)沉淀法是基于不同蛋白質(zhì)離子具有不同等電點(diǎn)這一特性，依次改變?nèi)芤簆H值的辦法，將雜蛋白沉淀除去，最后獲得目標(biāo)產(chǎn)物。

3.有機(jī)溶劑沉淀法 許多能與水互溶的有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮、甲醇和乙腈，常用于低鹽濃度下沉淀蛋白質(zhì)。 4.非離子型聚合物沉淀法 20世紀(jì)60年代非離子型聚合物開始用于分離血纖維蛋白原和免疫球蛋白，從此高相對(duì)分子質(zhì)量非離子聚合物沉淀蛋白質(zhì)的方法被廣泛使用，如：聚乙二醇（PEG）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、葡聚糖等。

5.金屬沉淀法 能與羧基、胺基等含氮化合物以及含氮雜環(huán)化合物強(qiáng)烈結(jié)合的金屬離子，如：Mn2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Cu2+、Zn2+、Cd2+； 能與羧酸結(jié)合而不與含氮化合物結(jié)合的金屬離子，如：Ca2+、Ba2+、Mg2+、Pb2+； 與巰基化合物強(qiáng)烈結(jié)合的金屬離子，如：Hg2+、Ag+、Pb2+。 實(shí)際使用時(shí)，金屬離子的濃度常為0.02 mol/L。

6.親和沉淀 初始階段：將一個(gè)目標(biāo)蛋白質(zhì)與鍵合在可溶性載體上的親和配體絡(luò)合成沉淀； 所得沉淀物用一生中適當(dāng)?shù)木彌_溶液進(jìn)行洗滌，洗去可能存在的雜質(zhì)； 用一種適當(dāng)?shù)脑噭⒛繕?biāo)蛋白質(zhì)從配體中離解出來。 7.選擇性變性沉淀法 （1）例如對(duì)于α-淀粉酶等熱穩(wěn)定性好的酶，可以通過加熱進(jìn)行熱處理，使大多數(shù)雜蛋白受熱變性沉淀而被除去。

（2）根據(jù)欲分離物質(zhì)所含雜質(zhì)的特性，通過改變pH值或加進(jìn)某些金屬離子等使雜蛋白變性沉淀而被除去。 8.反膠束萃取蛋白質(zhì) 菌體細(xì)胞提取 固液分離是生物產(chǎn)品生產(chǎn)中的重要單元操作。

培養(yǎng)基、發(fā)酵液、某些中間產(chǎn)品和半成品等都需進(jìn)行固液分離。發(fā)酵液由于種類多、粘度大及成分復(fù)雜，其固液分離最為困難。

固液分離的方法很多，生物工業(yè)中常規(guī)的方法有分離篩、重力沉降、浮選分離、離心分離和過濾等，其中用于發(fā)酵液固液分離的方法主要是離心分離和過濾。 二。

超濾膜濾去。

2.請(qǐng)問生物樣品中蛋白質(zhì)的處理方法有哪些

利用蛋白質(zhì)等生物大分子對(duì)熱的穩(wěn)定性不同，加熱破壞某些組分，而保存另一些組分，如脫氧核糖核酸酶對(duì)熱的穩(wěn)定性較核糖核酸酶差，加熱處理可使混雜在核糖核酸酶中的脫氧核糖核酸酶變性而沉淀；又如以黑曲霉發(fā)酵制備脂肪酶時(shí)，?；祀s有大量淀粉酶，當(dāng)把混合酶在40℃水中保溫2.5h(pH=3.4)時(shí)，則90%以上的淀粉酶受熱變性而沉淀。

加熱處理的方法只適用于對(duì)熱較穩(wěn)定的目的藥物成分，如灰黃霉素（可加熱至80~90℃）、抗敵素（又稱多黏菌素E）（可加熱至90℃左右）等。加熱不僅可使蛋白質(zhì)變性凝固，還可改變流體的流動(dòng)特性，利于固液分離，但要嚴(yán)格控制加熱溫度和時(shí)間。

加熱變性沉淀法的優(yōu)點(diǎn)在于操作簡(jiǎn)便、原材料消耗較低，但是，若直接通人蒸汽加熱，產(chǎn)生的冷凝水可使混合液體積增大，而且不能用于熱敏性藥物（如青霉素）的預(yù)處理。