高效液相色譜法定量的方法(高效液相色譜有幾種定量方法,其中哪種是比較精確的定量方法)
1.高效液相色譜有幾種定量方法,其中哪種是比較精確的定量方法
峰面積法、峰高法、歸一法、外標法。峰面積法是比較精確的定量方法
簡(jiǎn)介：
高效液相色譜法（\HPLC）又稱(chēng)“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。它是在生化和分析化學(xué)中常用的柱層析儀。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現對試樣的分析。該方法有效方便快捷地解決化學(xué)、醫學(xué)、工業(yè)、農學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中得出想要的數據，成為重要的分離分析技術(shù)。
2.高效液相色譜有幾種定量方法
峰面積法、峰高法、歸一法、外標法。
峰面積法是比較精確的定量方法簡(jiǎn)介：高效液相色譜法（\HPLC）又稱(chēng)“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。它是在生化和分析化學(xué)中常用的柱層析儀。
高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現對試樣的分析。該方法有效方便快捷地解決化學(xué)、醫學(xué)、工業(yè)、農學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中得出想要的數據，成為重要的分離分析技術(shù)。
3.HPLC法中定量分析方法大致有哪幾種
高效液相色譜以經(jīng)典的液相色譜為基礎，是以高壓下的液體為流動(dòng)相的色譜過(guò)程。
通常所說(shuō)的柱層析、薄層層析或紙層析就是經(jīng)典的液相色譜。所用的固定相為大于100um 的吸附劑（ 硅膠、氧化鋁等）。
這種傳統的液相色譜所用的固定相粒度大，傳質(zhì)擴散慢，因而柱效低，分離能力差，只能進(jìn)行簡(jiǎn)單混合物的分離。而高效液相所用的固定相粒度小（5um-10um）、傳質(zhì)快、柱效高。
高效液相色譜法（HPLC）是20世紀60年代后期發(fā)展起來(lái)的一種分析方法。近年來(lái)，在保健食品功效成分、營(yíng)養強化劑、維生素類(lèi)、蛋白質(zhì)的分離測定等應用廣泛。
世界上約有80%的有機化合物可以用HPLC來(lái)分析測定。 類(lèi)型： 吸附色譜 在吸附色譜中，樣品的極性官能團牢固地保留在填料的吸附活性中心上，非極性烴基幾乎不予保留。
所以，要清楚地辨別極性功能團的種類(lèi)、數量和位置。通常，樣品能用吸附色譜分離的應是能溶解于有機溶劑并是非離子型的，強離子樣品是不適宜的。
吸附色譜所使用的流動(dòng)相以正己烷、三氯甲烷、二氯甲烷作為基礎，按照樣品的極性加上乙醇，然而，最好是使所加入醇的濃度為10%或更少一些。如有可能，可進(jìn)一步減小百分數。
因為高濃度的醇會(huì )減少填料的吸附活性，減弱吸附能力，并使重現困難。 分配色譜 1.正相分配色譜 正相分配色譜適用于不溶于水而溶于有機溶劑且帶有極性基團的樣品，但正相分配色譜不適合于離子型物質(zhì)。
2.反相分配色譜 這種方法應用非常廣泛，應用的范圍也很廣，在反相分配色譜中，樣品的非極性部分起保留作用。 通過(guò)使用的流動(dòng)相是水—甲醇和水—乙腈，通過(guò)加入甲醇或乙腈的量的不同來(lái)調節分離，但如果樣品帶有離子型基團，需要在流動(dòng)相中加入鹽或調節流動(dòng)相的PH值，例如，如果樣品有一個(gè)—COOH 基團，使流動(dòng)相的PH值是偏向酸性的，由于抑制了—COOH基團的電離而加強了保留。
這個(gè)方法叫離子抑止法，如果樣品有強離子基，有時(shí)候采用在流動(dòng)相中加入適當抗衡離子以形成離子對的離子對法。 在調節PH值中，保持PH值在填料說(shuō)明書(shū)手冊中所規定的范圍內，大多數化學(xué)鍵式的二氧化硅使用在PH=2-9，然而，當加入鹽以后，最好使其PH=7.5-8或更小的，多孔聚合物填料能應用非常廣泛的PH值。
離子交換色譜 這個(gè)方法是用填料的固定相的離子交換基團和樣品的離子基團之間的離子交換來(lái)分離樣品組分的，按照所交換的離子分成陽(yáng)離子交換和陰離子交換。 離子交換色譜使用于能溶于水的離子型物質(zhì)。
在離子交換色譜中，流動(dòng)相的鹽的濃度、PH及鹽的種類(lèi)等都對保留值有很大的影響。在高效液相色譜的離子交換中所用的鹽有磷酸鹽、醋酸鹽和硼酸鹽。
因為氯化物會(huì )腐蝕不銹鋼儀器，在高效液相色譜中不能使用NaCl或其他的氯化物鹽類(lèi)。根據測量波長(cháng)有些鹽也不能使用，例如，醋酸吸收大約在210nm，當檢測處在短波端的時(shí)候，用醋酸作流動(dòng)相是不合適的。
凝膠色譜 凝膠色譜不同于以上三種分離方法。凝膠色譜是根據分子大小用分子篩效應來(lái)分離樣品組分的。
這個(gè)方法也叫排阻色譜或粒度排阻色譜。具有一定孔徑的多孔性合成聚合物經(jīng)常用作填料。
因為在樣品中，小尺寸的分子深深地滲透到微孔中，所以遲流出，而大尺寸的分子沒(méi)有滲透到微孔中，就很快流出。通常合成樹(shù)脂的分離使用有機溶劑作流動(dòng)相，叫做凝膠滲透色譜。
凝膠色譜依樣品的性質(zhì)又可分為凝膠滲透和凝膠過(guò)濾。 1.凝膠滲透色譜 凝膠滲透色譜（Gel Permeation Chromatography），簡(jiǎn)稱(chēng)GPC。
此一類(lèi)的色譜，使用于有機性溶媒的樣品中，如PVC,PS,ABS等等，而所用的洗脫液有THF,Chloroform等等。 2.凝膠過(guò)濾色譜 凝膠過(guò)濾色譜（Gel Filtrarion Chromatography），簡(jiǎn)稱(chēng)GFC。
此一種類(lèi)的層析法，使用于水溶媒的試劑中，如蛋白質(zhì)、淀粉及水性合成高分子等等，而所用的溶液有水、緩沖液等等。 凝膠的種類(lèi)很多，按其原料來(lái)源可分為有機膠和無(wú)機膠。
按其制備的方法又可分為均勻、半均勻和非均勻三種凝膠。而根據凝膠的強度又可分為軟膠、半硬膠和硬膠三大類(lèi)。
根據它對溶劑的適用范圍又可分為親水性、親油性和兩性凝膠等等。
4.高效液相色譜有哪些定量分析方法
1.外標法，是以對照品的量對比求算試樣含量的方法。
只要待測組分出峰、無(wú)干擾、保留時(shí)間適宜即可用外標法進(jìn)行定量分析。 2.內標法，是以待測組分和內標物的峰高比或峰面積比求算試樣含量的方法。
使用內標法可以抵消儀器穩定性差、進(jìn)樣量不夠準確等原因帶來(lái)的定量分析誤差。內標法可以分為校正曲線(xiàn)法、內標一點(diǎn)法（內標對比法）、內標二點(diǎn)法及校正因子法。
3.內加法，是將待測組分I的對照品加至待測試樣溶液中，測定增加對照品后的溶液比原試樣溶液中I組分的峰面積增量，求算I組分的含量。
5.有哪些常用的色譜定量方法
色譜定量方法比較2006年12月20日
星期三
15:31定量分析常用術(shù)語(yǔ)：
樣品（sample）含有帶測物，供色譜分析的溶液。分為標樣和未知樣。
標樣（standard）濃度已知的純品。
未知樣（unknow）濃度待測的混合物。
樣品量（sample
weight）待測樣品的原始稱(chēng)樣量。
稀釋度（dilution）未知樣的稀釋倍數。
組分（componance）欲做定量分析的色譜峰，即含量未知的被測物。
組分的量（amount）被測物質(zhì)的含量（或濃度）。
積分（integerity）由計算機對色譜峰進(jìn)行的峰面積測量的計算過(guò)程。
校正曲線(xiàn)（calibration
curve）組分含量對響應值的線(xiàn)性曲線(xiàn)，由已知量的標準物建立，用于測定待測物的未知含量。
常用的定量方法
標準曲線(xiàn)法，分為外標法和內標法。
外標法在液相色譜中用的最多。
內標法準確但是麻煩，在標準方法中用的最多。
外標法
用被測化合物的純品作為標準樣品，配制成一系列的已知濃度的標樣。
注入色譜柱的到其響應值（峰面積）。
在一定范圍內，標樣的濃度與響應值之間存在較好的線(xiàn)性關(guān)系，即W=f*A，制成標準曲線(xiàn)。
在完全相同的實(shí)驗條件下，注入未知樣品，得到欲測組分的響應值。
根據已知的系數f，即可求出欲測組分的濃度
外標法的優(yōu)點(diǎn)：
操作、計算簡(jiǎn)單，是一種常用的定量方法。
無(wú)需各組分都被檢出、洗脫。
需要標樣。
標樣及未知樣品的測定條件要一致。
進(jìn)樣體積要準確。
外標法缺點(diǎn)：
實(shí)驗條件要求高，如檢測器的靈敏度，流速、流動(dòng)相組成的不能發(fā)生變化；每次進(jìn)樣體積要有好的重復性。
內標法
操作：
將已知量的內標樣加入標準樣品，制成混合標樣，并配制一系列的已知濃度的工作標樣。混合標樣中標樣與內標樣的摩爾比不變。
注入色譜柱，以（標樣峰面積/內標樣峰面積）為響應值。
根據響應值與工作標樣濃度之間存在的線(xiàn)性關(guān)系，即W=f*A，制成標準曲線(xiàn)。
將已知量的內標樣加入未知樣品，注入色譜柱，得到欲測組分的響應值。
根據已知的系數f，即可求出欲測組分的濃度
內標法的特點(diǎn)：
操作過(guò)程中樣品和內標是混合在一起注入色譜柱的，因此只要混合溶液中被測組分與內標的量的比值恒定，上樣體積的變化不會(huì )影響影響定量結果。
內標法抵消了上樣體積，乃至流動(dòng)相、檢測器的影響，因此比外標法精確。
