菌種保藏主要的方法(保藏菌種的方法)

1.保藏菌種的方法有哪些

1、傳代培養保藏法：包括又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等，培養后于4-6℃冰箱內保存。

2、液體石蠟覆蓋保藏法：液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法，能夠適當延長(cháng)保藏時(shí)間。

3、載體保藏法：載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用于目前尚不能在人工培養基上生長(cháng)的微生物。

5、冷凍干燥保藏法：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現象除去水分（真空干燥），其中真空冷凍干燥法最常見(jiàn)。

擴展資料

菌種保藏的原理：

菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是運用一些方式盡量降低生物體內的代謝，達到延長(cháng)生命，減少變異的目的。通常采用的方法為低溫、缺氧、干燥。

低溫主要對菌種產(chǎn)生兩方面的影響，首先，較低的溫度可以減緩機體細胞的酶活，降低新陳代謝，達到保藏菌種的目的。其次，低溫同時(shí)會(huì )導致菌體誘發(fā)菌絲自溶機制，如果降溫過(guò)程失誤，同樣會(huì )造成機體的機械損傷和溶質(zhì)損傷。

參考資料來(lái)源：百度百科——菌種保藏

2.常用的菌種保存方法有哪些

菌種保藏是食用菌產(chǎn)業(yè)的一項基礎工作，是確保野生種質(zhì)資源基因留存和現有生產(chǎn)用種遺傳性能相對穩定的必要手段。

菌種保藏的方法多種多樣，有的雖然保藏效果好，但投資高或操作繁雜。在生產(chǎn)實(shí)踐中，更需要設備投入少，能保障菌種不死亡、不污染、最大限度地保持優(yōu)良種性的簡(jiǎn)便方法，如斜面低溫短期保藏和自然基質(zhì)較長(cháng)期保藏相結合的方法。

一般而言，對母種進(jìn)行長(cháng)期保存，對原種進(jìn)行短期保存。須保證優(yōu)良菌種的性狀和活力不發(fā)生變異，不死亡，不被污染，確保其純度。

因此，保存方法應具備取材容易、操作方便、菌種不易退化、長(cháng)期保存不污染雜菌等優(yōu)點(diǎn)。常用的菌種保存方法如下：（一）斜面低溫保藏 該法的優(yōu)點(diǎn)是保藏方便且所占空間較小。

具體做法是：菌絲長(cháng)滿(mǎn)斜面后，放在0~5℃保存。以后每隔一定時(shí)間（2~3個(gè)月）轉管一次。

轉管保存不能長(cháng)期用PDA培養基，否則種性易退化，灰樹(shù)花降解木質(zhì)纖維素的能力減弱。因此隔一定時(shí)間（1年左右）須把菌種轉接到木屑培養基上復壯，之后挑選健壯無(wú)污染的菌絲再轉回PDA培養基保存。

在長(cháng)期保存過(guò)程中，要防棉塞受潮滋生雜菌。菌種試管口最好用蠟燙封，以防培養基內水分過(guò)快蒸發(fā)。

增加瓊脂用量（2.5%~3%）可減緩水分蒸發(fā)。還要防止菌種管上的標簽脫落而造成種系混雜。

斜面低溫保藏方法簡(jiǎn)便易行，能隨時(shí)觀(guān)察保藏菌株的活力和純度，一旦染雜，肉眼能及時(shí)發(fā)現。（二）自然基質(zhì)保藏 此法是根據灰樹(shù)花的特性，利用自然基質(zhì)保藏其菌種的方法。

灰樹(shù)花是木腐菌，可以采用以木屑為主料的培養基。自然基質(zhì)營(yíng)養全面，且大部為緩釋養分，不易產(chǎn)生營(yíng)養過(guò)剩或饑餓；其次，培養基理化性狀好，可吸收或緩沖菌絲代謝出的有害物質(zhì)，水分與通氣協(xié)調平衡，部分菌絲扎入基質(zhì)內生長(cháng)，不裸露于空氣中，菌絲呼吸強度低，生命力強。

1.原料與配方 粗、細木屑比例適當，采用板栗樹(shù)木屑最佳，粗木屑粒徑為2毫米左右，細木屑為一般圓盤(pán)鋸屑，粗、細的比例為1∶2，添加干木屑重量20%的麩皮和1%的糖，含水率為60%左右。這樣的基質(zhì)通氣性好，營(yíng)養豐富且供菌絲分解利用的時(shí)間長(cháng)，長(cháng)到基質(zhì)內部的菌絲比包裹在基質(zhì)外部暴露于空氣中的菌絲耐受性強。

不同粒徑的基質(zhì)比例適當，還能協(xié)調氣與水的矛盾。粗粒過(guò)多，架空菌絲多；細粒過(guò)多，透氣性差，菌絲生長(cháng)慢。

應用配方如下：栗木屑78%，麩皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，裝入較粗大的試管中，裝料量為試管的1/3~1/2,1.5千克/厘米2滅菌1.5小時(shí)。冷卻后，接入需保藏的菌種，在28℃下培養，待菌絲長(cháng)滿(mǎn)木屑培養基時(shí)取出換上無(wú)菌橡皮塞，在0~5℃冰箱內保藏1~2年轉管一次。

2.容器與裝量 采用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗潔凈，裝量一般不超過(guò)玻璃瓶容量的3/5，填料不能過(guò)滿(mǎn)，瓶壁所殘留的顆粒須擦拭干凈，否則保藏的菌種易引起污染。3.滅菌和冷藏 滅菌時(shí)若采用棉塞封口，基質(zhì)表層易失水，接種成活率低，即使菌絲復活，生長(cháng)也很緩慢，所以最好采用聚丙烯膜封口，接種后換用無(wú)菌棉塞培養，待菌絲長(cháng)滿(mǎn)后再換成有孔滅菌膠塞冰箱保藏。

用上述方法保藏的菌種經(jīng)3年貯放后，接出成活率均達90%以上，出菇驗證產(chǎn)量及子實(shí)體形態(tài)特征均無(wú)明顯變化。因此，自然基質(zhì)保藏法具有保存期長(cháng)，菌種遺傳性能相對穩定的特點(diǎn)。

（三）木粒PDA斜面保藏 灰樹(shù)花在自然狀態(tài)下易發(fā)生于栗樹(shù)根部，這說(shuō)明其營(yíng)養需求較為特殊。根據灰樹(shù)花這種習性，在PDA基礎上添加適量的栗樹(shù)木粒制成母種培養基。

在多年的使用中發(fā)現，用該培養基培養的母種生長(cháng)勢好，在轉接原種時(shí)，適應能力強，萌發(fā)定植快；用作菌種保藏基質(zhì)時(shí)，保藏時(shí)間長(cháng)，并能很好保持菌種的優(yōu)良性狀。1.木粒PDA的制作 選取栗樹(shù)邊材，加工成0.3~0.5厘米的顆粒，及時(shí)烘干或曬干備用。

稱(chēng)取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解于1升清水中配制成營(yíng)養液。將營(yíng)養液倒入盛有木粒的小鋁鍋中，營(yíng)養液以完全浸沒(méi)木粒為準。

煮沸10分鐘，以加快木粒對營(yíng)養液的吸收速度，起鍋靜置30分鐘讓木粒吸足營(yíng)養液。撈出木粒，瀝掉表面的水，裝入試管，裝量為試管長(cháng)的1/6，最多不得超過(guò)試管長(cháng)的1/5，否則在擺制斜面時(shí)，不易使木粒均勻分散于斜面的表面上。

選取新鮮的馬鈴薯，去皮并切成薄片，稱(chēng)取200克放入小鋁鍋中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁熱過(guò)濾取汁，并補足1升的體積。稱(chēng)取瓊脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。

先將瓊脂剪碎，加入到馬鈴薯濾液中，繼續用文火加熱，使瓊脂溶化。待瓊脂完全溶化后，加入稱(chēng)好的其他3種營(yíng)養成分，攪拌使這些物質(zhì)溶解均勻，趁熱裝入已裝有木粒的試管中，裝至試管長(cháng)的1/3處，塞上棉塞。

在0.8~1千克/厘米2蒸氣壓下滅菌40分，待氣壓降至0時(shí)，開(kāi)蓋取出，趁熱輕輕抖拍試管，使木粒分散后即可擺制斜面，并使木粒呈半裸狀分布于斜面上，待凝固后便制成了木粒PDA培養基。2.生長(cháng)及保藏效果 木粒PDA斜面上培養的灰樹(shù)花母種，菌絲生長(cháng)迅速、良好，12天即可長(cháng)滿(mǎn)試管，但菌絲的后期生長(cháng)勢更為粗壯、濃密，后勁足。

轉接原種時(shí)，菌種適應力強，定植快。這表明，灰樹(shù)花菌絲的生長(cháng)速度、生長(cháng)勢不僅取決于本身的遺。

3.菌種的保藏有哪些方法

為了保持菌種的純凈，常需要進(jìn)行 菌種的保藏。

菌種的保藏分為臨時(shí)保藏 和長(cháng)期保藏。 1. 臨時(shí)保藏 臨時(shí)保藏常用于頻繁使用的菌種。

首先將菌種接種到試管的固體斜面培養 基上，在合適的溫度下培養。當菌落長(cháng) 大后，將試管放入4 °c的冰箱中保藏。

以后每3?6個(gè)月，都要重新將菌種從舊 的培養基上轉移到新鮮的培養基上。不 過(guò)此方法保存時(shí)間不長(cháng)，菌種容易被污 染或產(chǎn)生變異。

2. 長(cháng)期保藏 長(cháng)期保藏常用于需要長(cháng)期保存的菌 種，采用的是甘油管藏的方法。在3 mL 的甘油瓶中，裝入lmL甘油后滅菌。

將 1 mL培養的菌液轉移到甘油瓶中，與甘 油充分混合均勻后，放在一20 °C的冷凍 箱中保存。

4.食用菌的菌種有哪些保藏方法

(1)斜面低溫保藏。是一種最常用、最簡(jiǎn)便的菌種保藏方法。首先將需要保藏的菌種接到斜面培養基上，在適宜的溫度條下培養，當菌絲健壯地長(cháng)滿(mǎn)斜面時(shí)，即將此試管菌種取出，放置于4 ℃的冰箱中保藏。特點(diǎn)：

①簡(jiǎn)單易行，適用于各類(lèi)菇類(lèi)菌種保藏，是目前生產(chǎn)及科研普遍采用的一種方法；②保藏時(shí)間短，需6個(gè)月轉接一次，轉管次數多菌絲變異的可能性大；③如改用橡皮塞并用石蠟扣，可保藏1年~3年。

(2)液體石蠟保藏。液體石蠟保藏也稱(chēng)為礦油保藏，即用礦油覆蓋試管斜面試管保藏的方法。礦油是指無(wú)色、透明、黏稠、性質(zhì)穩定、不易被微生物分解的石蠟油和液體石蠟，將其覆蓋在斜面菌種之上，可以隔絕空氣，防治培養基水分蒸發(fā)，抑制微生物的代謝活動(dòng)，推遲細胞老化，從而達到長(cháng)期保藏菌種的目的。特點(diǎn)：

①方法簡(jiǎn)便易行，保藏條件不嚴格，保藏時(shí)間長(cháng)，可作為長(cháng)期保藏菌種的方法；②菌種必須垂直放，放置不方便。

(3)濾紙保藏。濾紙保藏是一種以無(wú)菌濾紙作為食用菌孢子吸附載體長(cháng)期保藏菌種的方法，又稱(chēng)濾紙孢子保藏法。特點(diǎn)：技術(shù)要求高，設備費用大，菌種不易衰老退化，菌種保藏時(shí)間長(cháng)很少變異。

(4)自然基質(zhì)保藏。自然基質(zhì)保藏就是以不含毒性、刺激性和抑菌性而富含營(yíng)養的自然生長(cháng)的基質(zhì)作培養基來(lái)保藏菌種的方法。自然基質(zhì)很多，食用菌常用的自然基質(zhì)有發(fā)酵的糞草、木屑及枝條基質(zhì)等，取材方便，制作方法簡(jiǎn)便，保藏時(shí)間也較長(cháng)。使用時(shí)，只需取一塊、一粒或一條培養物放在新鮮的培養基上，并在適溫下培養即可。特點(diǎn)：方法簡(jiǎn)便易行，保藏時(shí)間長(cháng)。

5.菌種保藏方法有哪些

菌種保藏方法很多，常用的有繼代培養低溫保藏、液體石蠟覆蓋保藏、蒸餾水覆蓋低溫保藏、超低溫冰箱保藏和液氮超低溫凍結保藏。

（1）繼代培養低溫保藏：將菌種放在4℃?6℃恒溫箱中保藏3?6個(gè)月，然后重新進(jìn)行移接，移接后再放回恒溫箱繼續保藏。此法是目前普遍采用的方法，優(yōu)點(diǎn)是應用儀器設備簡(jiǎn)單，操作方便，簡(jiǎn)便易行。

缺點(diǎn)是菌種退化快，較長(cháng)時(shí)間保藏后常出現菌絲生長(cháng)緩慢，甚至不能生長(cháng)現象，有的品種還會(huì )形成色素。 （2）液體石蠟覆蓋保藏：將無(wú)菌的液體石蠟覆蓋于菌種斜面表面，隔絕菌種的氧氣供應，以控制生長(cháng)，減緩老化，減少變異。

此法有時(shí)會(huì )出現大量分泌色素、發(fā)生角變、菌絲變稀變弱、生長(cháng)不正常等問(wèn)題。 （3）蒸餾水覆蓋低溫保藏：將無(wú)菌蒸餾水注入需保藏菌種的斜面菌種內，然后把菌袋（瓶）直立放置于4℃?6℃恒溫箱保藏。

此法常被用作菌種的短期保藏，1年左右需要繼代培養1次。 （4）超低溫冰箱保藏：此法需要超低溫冰箱，溫度控制在-76℃?-80℃，可以長(cháng)期保藏。

（5）液氮超低溫凍結保藏：此法是將菌種置于保護劑中，經(jīng)程序降溫至-90℃，將菌種置于液氮容器中長(cháng)期保藏。

6.菌種保藏的目的、原理及常用的方法有哪些

菌種保藏方法大全 基本原理 微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過(guò)程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。

低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據這三個(gè)因素而設計的。 保藏方法大致可分為以下幾種： 1.傳代培養保藏法 又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等（后者作保藏厭氧細菌用），培養后于4—6℃冰箱內保存。

2.液體石蠟覆蓋保藏法 是傳代培養的變相方法，能夠適當延長(cháng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養物和穿刺培養物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。3.載體保藏法 是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。

4.寄主保藏法 用于目前尚不能在人工培養基上生長(cháng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲(chóng)、雞胚內感染并傳代，此法相當于一般微生物的傳代培養保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5.冷凍保藏法 可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速凍結（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 6.冷凍干燥保藏法 先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現象除去水分（真空干燥）。

有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護劑來(lái)制備細胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對細胞的損害。保護性溶質(zhì)可通過(guò)氫和離子鍵對水和細胞所產(chǎn)生的親和力來(lái)穩定細胞成分的構型。

保護劑有牛乳、血清、糖類(lèi)、甘油、二甲亞砜等。 三、器材 細菌、酵母菌，放線(xiàn)菌和霉菌； 肉膏蛋白胨斜面培養基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學(xué)純的液體石蠟，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黃土或紅土，冰塊、食鹽，干冰，95%酒精，10%鹽酸，無(wú)水氯化鈣； 滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培養皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管（長(cháng)頸球形底），40目與 100目篩子，油紙，濾紙條（0.5*1.2cm），干燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，L形五通管，冰箱，低溫冰箱（-30℃），液氮冷凍保藏器。

四、操作步驟、各保藏法的應用范圍及優(yōu)缺點(diǎn) 下列各法可根據實(shí)驗室具體條件與需要選做。 1.斜面低溫保藏法 將菌種接種在適宜的固體斜面培養基上，待菌充分生長(cháng)后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。

保藏時(shí)間依微生物的種類(lèi)而有不同，霉菌、放線(xiàn)菌及有芽孢的細菌保存2—4個(gè)月，移種一次。酵母菌兩個(gè)月，細菌最好每月移種一次。

此法為實(shí)驗室和工廠(chǎng)菌種室常用的保藏法，優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，使用方便，不需特殊設備，能隨時(shí)檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點(diǎn)是容易變異，因為培養基的物理、化學(xué)特性不是嚴格恒定的，屢次傳代會(huì )使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機會(huì )亦較多。

2.液體石蠟保藏法 （1）將液體石蠟分裝于三角燒瓶?jì)龋厦奕⒂门Ｆぜ埌?.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘，然后放在40℃溫箱中，使水汽蒸發(fā)掉，備用。 （2）將需要保藏的菌種，在最適宜的斜面培養基中培養，使得到健壯的菌體或孢子。

（3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長(cháng)好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準（圖Ⅶ-12），使菌種與空氣隔絕。 （4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時(shí)間還要長(cháng)）。

此法實(shí)用而效果好。霉菌、放線(xiàn)菌、芽孢細菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般無(wú)芽孢細菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內，亦可保藏3個(gè)月之久。

此法的優(yōu)點(diǎn)是制作簡(jiǎn)單，不需特殊設備，且不需經(jīng)常移種。缺點(diǎn)是保存時(shí)必須直立放置，所占位置較大，同時(shí)也不便攜帶。

從液體石蠟下面取培養物移種后，接種環(huán)在火焰上燒灼時(shí)，培養物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應特別注意。 3.濾紙保藏法 （1）將濾紙剪成0.5*1.2cm的小條，裝入0.6*8cm的安瓿管中，每管1—2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘。

（2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養基上培養，使充分生長(cháng)。 （3）取滅菌脫脂牛乳1—2ml滴加在滅菌培養皿或試管內，取數環(huán)菌苔在牛乳內混勻，制成濃懸液。

（4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。 （5）將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。

（6）將棉花塞入管內，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存于低溫下。 （7）需要使用菌種，復活培養時(shí)，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開(kāi)啟后，取出濾紙，放入液體培養基內，置溫箱中培養。

細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14—17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡(jiǎn)便，不需要特殊設備。

4.沙土保藏法 。