常見的dna與rna提取方法(DNA實驗室常用的DNA提取方法)

1.DNA實驗室常用的DNA提取方法有哪些

提取DNA主要有SDS和CTAB法，其實提取效果的好壞主要看提取的對象是什么樣的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在設(shè)計實驗步驟。

一）CTAB法

CTAB是一種去污劑，可溶解細胞膜，它能與核酸形成復(fù)合物，在高鹽溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）時，從溶液中沉淀，通過離心就可將CTAB與核酸的復(fù)合物同蛋白質(zhì)、多糖類物質(zhì)分開，然后將CTAB與核酸的復(fù)合物沉淀溶解于高鹽溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。

（二）SDS法

利用高濃度的SDS，在較高溫度（55—65℃）條件下裂解細胞，使染色體離析，蛋白質(zhì)變性，釋放出核酸，然后采用提高鹽濃度及降低溫度的做法使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀（最常用的是加入5M的KAc于冰上保溫，在低溫條件下KAc與蛋白質(zhì)及多糖結(jié)合成不溶物），離心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反復(fù)抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。

以下是在提取熱帶水果DNA時設(shè)計的兩種不同方法步驟，對比起來CTAB法好，在禾本科植物效果差不多！

1、CTAB法

1） 在所需量的CTAB抽提液中加入2-巰基乙醇，使終濃度達2%(v/v)。將此溶液預(yù)熱至65℃。

對于每克新鮮的葉組織大約需要4ml的2-ME/CTAB抽提液。

2） 用液氮（-196℃）或干冰（-78℃）冷卻粉碎器/勻漿器，將0.5 g植物組織粉碎成細粉，然后將組織轉(zhuǎn)移到2.0 ml離心管。

3） 加入800 μl預(yù)熱的2-Me/CTAB，混合使之充分濕潤，于65℃溫育20 min，不時顛倒混勻。

4） 待冷至室溫后，加入800 μl氯仿/異戊醇（24:1），顛倒混勻至溶液呈乳濁狀----但不要振蕩。25℃，10000 rpm離心10 min。

5） 上清（~700 μl）轉(zhuǎn)移至另一干凈的離心管中，加入5 μl RNaseA貯液，37℃溫育30 min。

6） 加入700 μl氯仿/異戊醇，顛倒混勻，25℃，10000 rpm離心10 min。

7） 上清（~600 μl）轉(zhuǎn)移至另一干凈的1.5 ml離心管中，加入600 μl異丙醇，顛倒混勻，室溫或-20℃放置20 min。

8) 25℃，12000 rpm，離心10 min，收集沉淀。

9） 去上清，加1 ml70%乙醇洗滌沉淀兩次。（25℃，12000 rpm，離心10 min）

10）涼干DNA，溶于50 μl ddH2O,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2、SDS法

① 將0.3 g植物材料于液氮速凍，然后在研缽中將其磨碎，將粉末轉(zhuǎn)至2 ml離心管中。

② 加入1.2 ml預(yù)熱至65℃的提取緩沖液（其中加入3 μl β—巰基乙醇，增加DNA的穩(wěn)定性），置65℃水浴中放置30分鐘，不時顛倒混勻。

③ 加入0.45 ml 5M的醋酸鉀，混勻，冰浴20分鐘，在10000 rpm離心20 min。需要的話，Miracloth紗布過濾除去沉淀，上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中。

④ 加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），輕輕顛倒混勻，12000 rpm離心15 min。

⑤ 轉(zhuǎn)移上清液到另一新離心管中，加5 μl RNaseA貯液，37℃溫育30 min。

⑥ 加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），輕輕顛倒混勻，12000 rpm離心15 min。

⑦ 轉(zhuǎn)移上清液到另一新離心管中，加入0.7V異丙醇，輕輕顛倒混勻，-20℃放置30分鐘沉淀核酸。

⑧ 25℃，12000 rpm，離心10 min，收集沉淀。

⑨ 棄上清，70%乙醇洗兩次。

⑩ 涼干DNA，溶于50 μl ddH2O,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.分離DNA和RNA的方法有哪些

鹽析法 DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 利用這一特點 選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解 而使雜質(zhì)沉淀 或者相反 以達到分離目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后減小 在DNA溶解度最低時 DNA從溶液中析出 而其他雜質(zhì)還留在溶液中 達到粗提取的目的

酶水解法 采用RNase（可以買）水解雜質(zhì)RNA如果混入DNase酶可以采用100度加熱15min使其失活 RNase不會失活 反之采用DNase可以提取RNA 混了RNase、時加入蛋白酶K或加碘乙酸鈉

3.RNA的提取方法有哪些

通過變性劑破碎細胞或者組織，然后經(jīng)過氯仿等有機溶劑抽提RNA，再經(jīng)過沉淀，洗滌，晾干，最后溶解。

但是由于RNA酶無處不在，隨時可能將RNA降解，所以實驗中有很多地方需要注意，稍有疏忽就會前功盡棄。 0 T3 z( F& _, D6 c% ^" h6 Y A6 _RNA提取的一般步驟 - O: Y+ x$ p# s8 U4 M9 S 所有RNA的提取過程中都有五個關(guān)鍵點，即：樣品細胞或組織的有效破碎；有效地使核蛋白復(fù)合體變性；對內(nèi)源RNA酶的有效抑制；有效地將RNA從DNA和蛋白混合物中分離；對于多糖含量高的樣品還牽涉到多糖雜質(zhì)的有效除去。

但其中最關(guān)鍵的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前階段主要可采用兩種途徑：提取總核酸，再用氯化鋰將RNA沉淀出來；直接在酸性條件下抽提，酸性下DNA與蛋白質(zhì)進入有機相而RNA留在水相。

第一種提取方法將導(dǎo)致小分子量RNA的丟失，目前該方法的使用頻率已很低。（ O( g; ^+ K) f+ i& ]% P 實驗步驟： * l& d6 s5 e( q1 F( g2 | j, ^0 s 破碎組織→分離RNA→沉淀RNA→洗滌RNA→融解RNA→保存RNA。

6 D8 }. Q; Y, g* X 1、破碎組織和滅活RNA酶可以同步進行，可以用鹽酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎組織，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。 " s% f, `0 [1 d* m! ]0 e2、分離RNA一般用酚、氯仿等有機溶劑，加入少量異戊醇，經(jīng)過此步，離心，RNA一般分布于上層，與蛋白層分開。

& X. P) i) Y; L# u/ [3、沉淀RNA一般用乙醇、3M NaAc(pH-5.2)或異丙醇。2 @0 d& z7 ?+ i, g1 @ 4、洗滌RNA使用70%乙醇洗滌，有時，為避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗滌之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能過于干燥，否則不易溶解。

3 @% V" o9 v+ I1 J2 o9 k" z5、融解RNA一般使用TE。 ; L5 f. n6 }( S1 t% Z& J6、保存RNA應(yīng)該盡量低溫。

為了防止痕量RNase的污染，從富含RNase的樣品（如胰臟、肝臟）中分離到的RNA需要貯存在甲醛中以保存高質(zhì)量的RNA，對于長期貯存更是如此。從大鼠肝臟中提取的RNA，在水中貯存一個星期就基本降解了，而從大鼠脾臟中提取的RNA，在水中保存3年仍保持穩(wěn)定。

另外，長度大于4kb的轉(zhuǎn)錄本對于痕量RNase的降解比小轉(zhuǎn)錄本更敏感。為了增加貯存RNA樣品的穩(wěn)定性，可以將RNA溶解在去離子的甲酰胺中，存于-70℃。

用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的雜物。來源于胰臟的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。

當(dāng)準(zhǔn)備使用RNA時，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M,12,000*g離心5分鐘。 & P3 [7 m* ^$ U$ _" ? : F" x u* N( ?( I氯化鋰法提取總RNA: " u; }' I! r' ^' ^& l 本方法用高濃度尿素變性蛋白并抑制RNA酶，用氯化鋰選擇沉淀RNA，其特別適合于從大量樣品中提取少量組織RNA，具有快速簡潔的長處，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高，小RNA片斷丟失的缺陷。

# ~* S: }9 `* r4 Z3 P 試驗試劑： " d$ r6 Q+ _. I8 Q1、氯化鋰/尿素溶液【氯化鋰126g(3M) 尿素、360g(6M) 加水至1L，過濾滅菌】 7 _8 w1 t" o9 a' q! i4 Z2、懸浮液【10mM? Tris-HCL (pH7.6) ,1mM? EDTA (pH8,0) ,0.5%SDS】 ！ m8 Q4 R, ]& y: b# `7 d試驗步驟：7 [6 ?$ `* }; o7 _ Z' { 1、對于大量組織或細胞，則每克組織或細胞加入5-10ml氯化鋰-尿素溶液，勻槳器高速勻槳2分鐘；對于少量細胞（107個細胞/ml），則每克組織或細胞加入0.5ml氯化鋰-尿素溶液手工勻槳，并轉(zhuǎn)移至Eppendof管中。& Y) b: E, Q" l/ ^ Q: \$ s 2、勻槳液在0-4℃放置4小時后，12000g離心30分鐘。

x- C6 D- N/ N0 K! t2 a 3、取沉淀，加入原勻槳液1/2體積的氯化鋰-尿素溶液，重復(fù)步驟2。 ) y- x) S0 K9 y6 j, e4、沉淀用原勻槳液1/2體積的氯化鋰-尿素溶液復(fù)溶后，加入等體積酚/氯仿/異戊醇在室溫放置15-30分鐘并不時搖動混勻，4000g離心5分鐘。

3 d2 v' i1 ~( ~* D5、取上層水相，加1/10倍體積的3M乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，-20℃放置1小時，5000g離心。 L4 a' Q4 u" l: a* K% Z$ ?( e6、70%乙醇洗沉淀一次。

真空干燥。3 }; r0 [/ Q' G9 q 7、RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分裝，于-70℃保存。

0 f. X% R( H% B7 g ! y7 j5 u$ C' |) [% ~! J3 D: Q蛋白酶-熱酚法6 |" ^0 b* [) P3 S* c4 b4 H4 l 本方法適合于病毒RNA的提取 * I( i+ b# r! K試驗試劑： $ ？4 [7 H9 `) J1、蛋白酶K（終濃度50ug/ml）, J5 p l6 V/ t7 [/ I 2、2*緩沖液：1%SDS? 20mMTris-HCL (pH 7.6)? 0.2MnaCL9 h, p ] y+ \$ Z) O 試驗步驟：# W3 v8 G1 [$ ]5 y 1、提純病毒液中加入等體積緩沖液、蛋白酶K,37℃40-50分鐘。 - K0 p/ E' G0 M# Q- z7 n, {# d2、加入等體積65℃預(yù)熱的酚溶液，輕徭，在65℃保溫5分鐘后再輕徭。

w! `; W( ~, E: i3 ^3、離心，取上清，氯仿抽提一次。， |（ Z0 d; j2 @7 m+ d2 Q& x H 4、取上層水相，加1/10倍體積的3M乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，-20℃放置1小時，5000g離心（10000g,10min）。

7 [/ w, h2 d6 U$ k5、70%乙醇洗沉淀一次。真空干燥。

% A5 Y; {( w% ]3 a* y, O e) P6、RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分裝，于-70℃保存。植物RNA提取過程中難點的相應(yīng)對策 植物RNA提取過程中難點的相應(yīng)對策 ） o5 B7 d/ Q3 _酚類化合物的干擾及對策： 。

4.分離DNA和RNA主要方法有哪些

鹽析法 DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 利用這一特點 選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解 而使雜質(zhì)沉淀 或者相反 以達到分離目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后減小 在DNA溶解度最低時 DNA從溶液中析出 而其他雜質(zhì)還留在溶液中 達到粗提取的目的酶水解法 采用RNase（可以買）水解雜質(zhì)RNA如果混入DNase酶可以采用100度加熱15min使其失活 RNase不會失活 反之采用DNase可以提取RNA 混了RNase、時加入蛋白酶K或加碘乙酸鈉。

5.提取DNA的方法有哪些

DNA提取的幾種方法

(1).濃鹽法

利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.

也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白.

兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些.

以稀鹽酸溶液提取DNA 時，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離.在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA.

(2).陰離子去污劑法：

用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA.

(3).苯酚抽提法：

苯酚作為蛋白變性劑，同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA .此時DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團，取出.此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .

( 4).水抽提法：

利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過程中加入SDS.

6.分離DNA和RNA主要方法有哪些

[思路分析]：①取雞血細胞液（其紅細胞橢圓具核，除駱駝外，豬、羊、狗等哺乳動物紅細胞無核），或取新鮮豬肝、菜花、洋蔥等材料.雖然在細菌的轉(zhuǎn)化實驗中提取的是無核細胞中的DNA，但一般而言，均是從具核的生物材料中提取DNA.當(dāng)然，在提取出的DNA中也含有一定量的胞質(zhì)DNA，即線粒體DNA和葉綠體DNA.值得推介的材料是洋蔥，取材容易，操作簡便，效果明顯.將家用加鹽洗潔精與洋蔥碎屑混合研磨并過濾后，再加酒精，微搖后即出現(xiàn)白色的毛絮狀DNA混合物.②使紅細胞溶血破膜以及化學(xué)藥劑十二烷基磺酸鈉 SDS（洗潔精的主要成分）或三氯乙酸溶膜.在低滲溶液中，如加蒸餾水使血細胞過度滲透吸水直至破裂，同時用玻棒加速血細胞及核破裂，經(jīng)一級過濾后濾出液為DNA核蛋白和RNA核蛋白.對于菜花、洋蔥等植物材料，在研磨破壞其細胞壁的同時，可考慮適量加入乙二胺四乙酸EDTA以防止DNA酶解.③利用DNA和RNA溶解度的不同析出DNA.在濃氯化鈉溶液（2 mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很大，而RNA核蛋白的溶解度很小.在稀氯化鈉溶液（0.14mol/L）中DNA的溶解度最低，蛋白質(zhì)的溶解度很高而出現(xiàn)鹽溶現(xiàn)象，經(jīng)二級過濾后濾出液主要為DNA粗制品.④DNA不溶于酒精，經(jīng)三級過濾后，再利用乙醇沉淀法使其他物質(zhì)溶于酒精而進一步純化DNA.⑤二苯胺或甲基綠鑒定法即DNA遇二苯胺（沸水?。┍蝗境伤{色，遇甲基綠被染成藍綠色，且顏色的深淺與DNA純化程度有關(guān).在此過程中設(shè)計對照實驗，以增強實驗中二苯胺對DNA專一性顯色結(jié)果的可信度.分離DNA和RNA主要方法有哪些。

7.DNA的提取方法有多少種

DNA的提取方法有7種：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒纏繞法、異丙醇bai沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制du備、堿變性快速制備。

DNA的提取原則

1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性；

2、核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；

3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)zhi降低到最低程度；

4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。

擴展資料

提取daoDNA的注意事項

1、各操作內(nèi)步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。

2、注意防止非核酸類成分干擾。

3、要減少DNA的降解，促進DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。

4、提取DNA過程中所用到的試劑和器材容要通過高壓烤干等辦法進行無核酸酶化處理。

5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。

參考資料來源：百度百科-dna提取