檢測細胞活力的實(shí)驗方法(細胞活力測定的方法)

1.細胞活力測定的方法有哪些

根據每個(gè)細胞有一定的重量而設計的。

它可以用于單細胞、多細胞以及絲狀體微生物生長(cháng)的測定。將一定體積的樣品通過(guò)離心或過(guò)濾將菌體分離出來(lái)，經(jīng)洗滌，再離心后直接稱(chēng)重，求出濕重，如果是絲狀體微生物，過(guò)濾后用濾紙吸去菌絲之間的自由水，再稱(chēng)重求出濕重。

不論是細菌樣品還是絲狀菌樣品，可以將它們放在已知重量的平皿或燒杯內，于105℃烘干至恒重，取出放入干燥器內冷卻，再稱(chēng)量，求出微生物干重。如果要測定固體培養基上生長(cháng)的放線(xiàn)菌或絲狀真菌，可先加熱至50℃，使瓊脂熔化，過(guò)濾得菌絲體，再用50℃的生理鹽水洗滌菌絲，然后按上述方法求出菌絲體的濕重或干重。

除了干重、濕重反映細胞物質(zhì)重量外，還可以通過(guò)測定細胞中蛋白質(zhì)或DNA的含量反映細胞物質(zhì)的量。蛋白質(zhì)是細胞的主要成分，含量也比較穩定，其中氮是蛋白質(zhì)的重要組成元素。

從一定體積的樣品中分離出細胞，洗滌后，按凱氏定氮法測出總氮量。蛋白質(zhì)含氮量為16%，細菌中蛋白質(zhì)含量占細菌固形物的50%一80%，一般以65%為代表，有些細菌則只占13%一14%，這種變化是由菌齡和培養條件不同所產(chǎn)生的。

因此總含氮量與蛋白質(zhì)總量之間的關(guān)系可按下列公式計算：蛋白質(zhì)總量=含氮量*6.25核酸DNA是微生物的重要遺傳物質(zhì)，每個(gè)細菌的DNA含量相當恒定，平均為8.4*`10^(-5)`NG。因此從一定體積的細菌懸液中所含的細菌中提取DNA，求得DNA含量，再計算出這一定體積的細菌懸液所含的細菌總數。

2.如何選用細胞活力的測試方法

細胞活性測定方法有臺盼藍染色法、克隆（集落）形成法、3H 放射性同位素摻入法、MTT 法等。其中 MTT 法以其快速簡(jiǎn)便，不需要特殊檢測儀器、無(wú)放射性同位素、適合大批量檢測的特點(diǎn)而得到廣泛的應用。

但 MTT 法形成的 Formazan 為水不溶性的，需要加有機溶劑溶解，由于在去上清操作時(shí)會(huì )有可能帶走小部分的 Formazan ，故有時(shí)重復性略差。為了解決這個(gè)問(wèn)題，研究人員又開(kāi)發(fā)了很多種水溶性的四氮唑鹽類(lèi)：如 XTT 、CCK-8 ( WST-8 )等。