核酸含量測(cè)定常用的方法(測(cè)定核酸含量的方法)
1.測(cè)定核酸含量的方法有哪些
核酸中的有機(jī)無機(jī)磷酸——→無機(jī)磷酸+鉬酸——→磷鉬酸+還原劑（抗壞血酸等）——→鉬蘭
鉬蘭的最大吸收波長(zhǎng)在660nm，在一定濃度范圍內(nèi)，溶液的吸收值與無機(jī)磷的含量成正比。該法測(cè)得的是總磷量，需減去無機(jī)磷的含量才是核酸的含磷量。
（二）定糖法
核酸中的戊糖可在濃鹽酸或濃硫酸作用下脫水生成醛類化合物，醛類化合物可與某些成色劑縮合成有色化合物，可用比色法或分光光度法測(cè)定其溶液中的吸收值，在一定濃度范圍內(nèi)，溶液的吸收值與核酸的含量成正比。
1、核糖的測(cè)定
生成的綠色化合物在λ=670nm處有最大的吸收值。
2、脫氧核糖的測(cè)定
DNA中的脫氧核糖可在濃硫酸作用下脫水生成ω-羥基-γ-酮戊酸，該化合物可與二苯胺生成蘭色化合物，在λ=595nm處有最大吸收值。
（三）紫外吸收法
根據(jù)核酸分子中的嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)在λ=260nm處有最大吸收值，可采用紫外分光光度法測(cè)定核酸的含量。
2.核酸含量測(cè)定的方法和原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下： 1、光吸收法：核酸中堿基共軛結(jié)構(gòu)在近紫外光波長(zhǎng)260nm處有最大吸收，吸收強(qiáng)度與核酸濃度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量約為9.5%，因此可以通過測(cè)定樣品中的有機(jī)P量來進(jìn)行核酸定量。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。
核酸廣泛存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞、微生物體內(nèi)，生物體內(nèi)的核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。不同的核酸，其化學(xué)組成、核苷酸排列順序等不同。
根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為核糖核酸（簡(jiǎn)稱RNA）和脫氧核糖核酸（簡(jiǎn)稱DNA）。
3.核酸含量的測(cè)定方法及原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下： 1、光吸收法：核酸中堿基共軛結(jié)構(gòu)在近紫外光波長(zhǎng)260nm處有最大吸收，吸收強(qiáng)度與核酸濃度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量約為9.5%，因此可以通過測(cè)定樣品中的有機(jī)P量來進(jìn)行核酸定量。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。
核酸廣泛存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞、微生物體內(nèi)，生物體內(nèi)的核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。不同的核酸，其化學(xué)組成、核苷酸排列順序等不同。
根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為核糖核酸（簡(jiǎn)稱RNA）和脫氧核糖核酸（簡(jiǎn)稱DNA）。
4.核酸檢測(cè)方法有哪些
核酸檢測(cè)采用咽拭子檢測(cè)，有口咽拭子采樣和鼻咽拭子采樣兩種方式。
口咽拭子采樣就是在咽喉部位用棉簽涂擦，刷取咽喉部位上皮細(xì)胞的檢測(cè)。受檢測(cè)者只要放松心情，張口發(fā)出“啊——”的聲音就可以了，檢測(cè)過程并沒有創(chuàng)傷風(fēng)險(xiǎn)，是非常安全的檢測(cè)。
檢測(cè)時(shí)可能會(huì)有惡心、想要嘔吐的不適感覺，不過這些不適癥狀通常只需要半分鐘到兩分鐘左右就可以完全緩解了。鼻咽拭子采樣是將一根細(xì)棉簽深入鼻孔，從下鼻道深入抵達(dá)鼻咽后壁，然后捻轉(zhuǎn)棉簽取樣。
棉簽進(jìn)入鼻腔的深度約為鼻尖到耳垂的距離。擴(kuò)展資料：核酸檢測(cè)相關(guān)知識(shí)：核酸檢測(cè)是檢測(cè)病毒的方法，它可以更早發(fā)現(xiàn)感染。
現(xiàn)在臨床中對(duì)乙肝、丙肝、艾滋病都開展了核酸檢測(cè)，可以在抗體產(chǎn)生前檢測(cè)到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通過咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸檢測(cè)來判斷是否感染，以及推測(cè)是否具有傳染性。
季節(jié)性流感、禽流感、冠狀病毒感染等通過咽拭子檢測(cè)可以方便地判斷出上呼吸道是否存在病毒成份，從而判斷被檢測(cè)者是否屬于感染者。新冠病毒的核酸檢測(cè)已經(jīng)是比較成熟的檢測(cè)方法了，只要在咽喉部位擦拭幾秒鐘就可以采集到標(biāo)本。
通過分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分，可以盡早發(fā)現(xiàn)感染者，甚至在感染者出現(xiàn)癥狀前就可以檢測(cè)到陽性。感染者經(jīng)過隔離治療后咽拭子檢測(cè)陰性說明病毒已經(jīng)清除，不具有傳染性了。
目前兩次咽拭子核酸檢測(cè)陰性是確診病例和無癥狀感染者解除隔離的標(biāo)準(zhǔn)之一。參考資料來源：人民網(wǎng)-核酸檢測(cè)究竟是怎么回事。
5.核酸定量常見方法
去百度文庫，查看完整內(nèi)容>內(nèi)容來自用戶：孤墨陽核酸定量的常用方法、原理、優(yōu)缺點(diǎn)等。
紫外分光光度法：利用核酸中的嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，在紫外光的照射下在260nm處有最大吸收峰的原理對(duì)核酸進(jìn)行定量和定性的方法。是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)較為常用的方法。
優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，設(shè)備要求低。缺點(diǎn)：靈敏度不夠高，只能測(cè)定總核酸量，不能區(qū)分核算種類；易受樣品中其他雜質(zhì)的干擾（如pH值、殘留的提取劑等）。
熒光染料法：基于熒光染料與核酸分子結(jié)合，發(fā)出的熒光信號(hào)強(qiáng)度與結(jié)合的核酸分子數(shù)成正比的原理設(shè)計(jì)的。常用的熒光染料有嗅化乙錠、SYBR系列染料等。
優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，所需樣品量少，可重復(fù)性高。缺點(diǎn)：染料一般都含有較高毒性，檢測(cè)結(jié)果受染料與核酸的結(jié)合率影響。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR法：在反應(yīng)體系內(nèi)加入熒光基團(tuán)，通過熒光基團(tuán)發(fā)出熒光信號(hào)經(jīng)積累來實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR的反應(yīng)過程，最后通過相對(duì)定量或者絕對(duì)定量的方法對(duì)未知濃度的核酸進(jìn)行定量分析。常用的檢測(cè)方法有TaqMan探針和熒光染料兩種。
TaqMan探針法：利用Taqman酶在特異性引物上增加一條熒光雙標(biāo)記的探針，分別標(biāo)記有熒光信號(hào)基團(tuán)R和淬滅基團(tuán)Q，當(dāng)二者都存在的時(shí)候R基團(tuán)受Q基團(tuán)影響不發(fā)出熒光信號(hào)，而在PCR反應(yīng)過程中，聚合酶將探針的堿基水解，R與Q基團(tuán)分離，R基團(tuán)發(fā)出熒光信號(hào)，模板每擴(kuò)增一次，就產(chǎn)生一次熒光信號(hào)，通過對(duì)熒光信號(hào)的檢測(cè)和繪制熒光信號(hào)曲線，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比分析，可對(duì)核酸進(jìn)行定量。優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，缺點(diǎn)是探針序列設(shè)計(jì)時(shí)需要強(qiáng)特異。
6.核酸定量常見方法
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內(nèi)容來自用戶：孤墨陽
核酸定量的常用方法、原理、優(yōu)缺點(diǎn)等。
紫外分光光度法：利用核酸中的嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，在紫外光的照射下在260nm處有最大吸收峰的原理對(duì)核酸進(jìn)行定量和定性的方法。是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)較為常用的方法。
優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，設(shè)備要求低。
缺點(diǎn)：靈敏度不夠高，只能測(cè)定總核酸量，不能區(qū)分核算種類；易受樣品中其他雜質(zhì)的干擾（如pH值、殘留的提取劑等）。
熒光染料法：基于熒光染料與核酸分子結(jié)合，發(fā)出的熒光信號(hào)強(qiáng)度與結(jié)合的核酸分子數(shù)成正比的原理設(shè)計(jì)的。常用的熒光染料有嗅化乙錠、SYBR系列染料等。
優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，所需樣品量少，可重復(fù)性高。
缺點(diǎn)：染料一般都含有較高毒性，檢測(cè)結(jié)果受染料與核酸的結(jié)合率影響。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR法：
在反應(yīng)體系內(nèi)加入熒光基團(tuán)，通過熒光基團(tuán)發(fā)出熒光信號(hào)經(jīng)積累來實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR的反應(yīng)過程，最后通過相對(duì)定量或者絕對(duì)定量的方法對(duì)未知濃度的核酸進(jìn)行定量分析。常用的檢測(cè)方法有TaqMan探針和熒光染料兩種。
TaqMan探針法：利用Taqman酶在特異性引物上增加一條熒光雙標(biāo)記的探針，分別標(biāo)記有熒光信號(hào)基團(tuán)R和淬滅基團(tuán)Q，當(dāng)二者都存在的時(shí)候R基團(tuán)受Q基團(tuán)影響不發(fā)出熒光信號(hào)，而在PCR反應(yīng)過程中，聚合酶將探針的堿基水解，R與Q基團(tuán)分離，R基團(tuán)發(fā)出熒光信號(hào)，模板每擴(kuò)增一次，就產(chǎn)生一次熒光信號(hào)，通過對(duì)熒光信號(hào)的檢測(cè)和繪制熒光信號(hào)曲線，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比分析，可對(duì)核酸進(jìn)行定量。優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，缺點(diǎn)是探針序列設(shè)計(jì)時(shí)需要強(qiáng)特異
7.核酸的定量測(cè)定用什么方法
核酸的定量測(cè)定——定磷法 [原理] 磷的測(cè)定方法很多，F(xiàn)iske-Subbarow定磷法是一經(jīng)典的但至今仍被經(jīng)常采用的方法，它具有靈敏、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。
各種含磷有機(jī)物經(jīng)硫酸或過氯酸水解，使有機(jī)磷消化成為無機(jī)磷。無機(jī)磷在酸性條件下，與鉬酸鹽（常用鉬酸銨或鉬酸鈉）反應(yīng)生成磷鉬酸鹽絡(luò)合物。
用還原劑處理，磷鉬酸鹽絡(luò)合物被還原生成鉬藍(lán)，在660nm處有最大光吸收峰。在一定濃度范圍內(nèi)，顏色的深淺與磷含量成正比關(guān)系。
因此可應(yīng)用分光光度法進(jìn)行磷的定量測(cè)定。 生物幫上面相關(guān)的專題資料的， 生物問答 /。
