工業(yè)化培養(yǎng)細菌的方法(細菌培養(yǎng)的方法)

1.細菌培養(yǎng)的方法有哪些

根據(jù)培養(yǎng)細菌的目的和培養(yǎng)物的特性培養(yǎng)方法分為一般培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法三種。

1、一般培養(yǎng)法：將已接種過的培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)18-24小時，需氧菌和兼性厭氧菌即可于培養(yǎng)基上生長。少數(shù)生長緩慢的細菌，需培養(yǎng)3-7天直至一個月才能生長。

為使培養(yǎng)箱內(nèi)保持一定濕度，可在其內(nèi)放置一杯水。培養(yǎng)時間較長的培養(yǎng)基，接種后應將試管口塞棉塞后用石臘凡士林封固，以防培養(yǎng)基干裂。

2、二氧化碳培養(yǎng)法：某些細菌，如牛流產(chǎn)布氏桿菌和胎兒弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空氣中才能生長，尤其是初代分離培養(yǎng)要求更為嚴格。將已接種的培養(yǎng)基置于二氧化碳環(huán)境中進行培養(yǎng)的方法即二氧化碳培養(yǎng)法，

3、厭氧培養(yǎng)法：常用的厭氧培養(yǎng)方法有厭氧罐法、氣袋法及厭氧箱三種。

擴展資料：

培養(yǎng)時應根據(jù)細菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基，制定培養(yǎng)條件（溫度、pH值、時間，對氧的需求與否等）。

一般操作步驟為先將標本接種于固體培養(yǎng)基上，做分離培養(yǎng)。再進一步對所得單個菌落進行形態(tài)、生化及血清學反應鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質(zhì)配制成液體、半固體、固體等。

一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18~24小時生長。厭氧菌則需在無氧環(huán)境中放2~3天后生長。個別細菌如結(jié)核菌要培養(yǎng)1個月之久。

通過日常管理、檢測、檢查，了解光合細菌的生長情況，就可以結(jié)合當時環(huán)境條件的變化進行分析，找出影響光合細菌生長繁殖的原因，采取相應的措施。影響光合細菌生長的原因很多，內(nèi)因是菌種是否優(yōu)良，外因是光照、溫度、營養(yǎng)、敵害和厭氣程度等。

溫度、光照和pH值都能影響著光合細菌的生長，而且溫度、光照和pH值之間是互相制約的，溫度與光照的強弱是對立統(tǒng)一的，所以光合細菌生長的最適條件應是互應的，即溫度高，光照應弱；溫度低，光照應強。

如果是溫度高，光照強，pH值就會迅速升高，培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀，抑制光臺細菌的生長；如果溫度低，光照弱，光合細菌得不到最佳能源，生長速度也慢。經(jīng)試驗得出光合細菌生長的最適條件是：

①溫度15~20℃時，光照30000~50000lx，培養(yǎng)基pH值為7.0;

②溫度25~30℃時，光照為3000~5000lx，培養(yǎng)基的pH值為7.0。

參考資料來源：搜狗百科——細菌培養(yǎng)

2.微生物的培養(yǎng)方法有哪些

1905年，德國微生物學家科赫因?qū)Y(jié)核桿菌和結(jié)核菌素的研究取得重大成就而榮獲諾貝爾獎金。

他發(fā)明固體培養(yǎng)基，用它分離培養(yǎng)細菌，創(chuàng)造細菌的純粹培養(yǎng)法。他又改進細菌染色法，為研究細菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)創(chuàng)造有利條件。

荷蘭科學家E.C.翰遜教授研究使啤酒發(fā)酵的酵母，創(chuàng)造單細胞的純粹培養(yǎng)法。以后，又有人采用純粹培養(yǎng)法選擇適當酵母，用于啤酒的工業(yè)生產(chǎn)，為純粹培養(yǎng)法在工業(yè)發(fā)酵上的應用開辟了道路。

翰遜的學生哈斯發(fā)現(xiàn)，當時用的由明膠制成的固體培養(yǎng)基很容易發(fā)生液化現(xiàn)象，使用時有困難。哈斯的妻子建議用瓊脂代替明膠，獲得了較好的效果。

這種瓊脂培養(yǎng)基被后人采用，一直沿用到今天。后來又有人創(chuàng)造一種培養(yǎng)皿，可供微生物平板分離用。

從此以后，分離出的微生物日益增多，新的微生物不斷被發(fā)現(xiàn)。這樣，可供工業(yè)用的微生物也日益充實起來，一支微生物生力軍異軍突起。

3.細菌分離培養(yǎng)的基本要領和常用方法有哪些

一、基本要領

菌種分離主要在培養(yǎng)皿上進行，常用的方法是稀釋法和劃線法。

菌種分離的目的是是微生物的一個個體通過繁殖，在固體培養(yǎng)基上長出肉眼能見的群體，然后根據(jù)培養(yǎng)特征，用接種針調(diào)取所需菌種并在顯微鏡下檢查，證明為單一形狀的菌體。

改變培養(yǎng)基條件也有助于菌種分離。沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足一切微生物生長的需要，在一定程度上所有的培養(yǎng)基都是選擇性的。

如果某種微生物的生長需要是已知的，也可以設計特定環(huán)境使之適合這種微生物的生長，因而能夠從混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養(yǎng)出來，盡管在混雜的微生物群體中這種微生物可能只占少數(shù)。

二、方法

1、稀釋倒平板法

首先把微生物懸液作一系列的稀釋（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分別取不同稀釋液少許，與已熔化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時間即可出現(xiàn)菌落。

如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個菌落，或重復以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。

2、涂布平板法

因為將微生物懸液先加到較燙的培養(yǎng)基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，且采用稀釋倒平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學研究中常用的純種分離方法是涂布平板法。

其做法是先將已熔化的培養(yǎng)基倒入無菌平皿，制成無菌平板，冷卻凝固后，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個平板表面，經(jīng)培養(yǎng)后挑取單個菌落。

3、平板劃線法

最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法，即用接種環(huán)以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行連續(xù)劃線，微生物細胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。

有時這種單菌落并非都由單個細胞繁殖而來的，故必須反復分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點到線”稀釋而達到分離目的的。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。

4、稀釋搖管法

用固體培養(yǎng)基分離嚴格厭氧菌有特殊性，如果該微生物暴露于空氣中不立即死亡，可以采用通常的方法制備平板，然后置放在封閉的容器中培養(yǎng)，容器中的氧氣可采用化學、物理或生物的方法清除。

對于那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養(yǎng)的分離則可采用稀釋搖管培養(yǎng)法進行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。

先將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝后，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養(yǎng)基和空氣隔開。

培養(yǎng)后，菌落形成在瓊脂柱的中間。進行單菌落的挑取和移植，需先用一只滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一只毛細管插入瓊脂和管壁之間，吹入無菌無氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培養(yǎng)皿中，用無菌刀將瓊脂柱切成薄片進行觀察和菌落的移植。

擴展資料

在以上介紹的幾種方法中，平板分離法普遍用于實驗室微生物的分離與純化，稀釋法是液體培養(yǎng)基分離純化常用的方法。

一般情況下可以通過適當改善培養(yǎng)基的條件來培養(yǎng)特點菌種。

如為了得到嗜熱微生物，可在50℃~60℃下進行培養(yǎng)。有時投加相應的抑制劑也能提高菌種分離效果，如在土壤樣品的懸浮液中投加10%的苯酚數(shù)滴，可以抑制霉菌和細菌的生長，而有利于放線菌的分離。在培養(yǎng)基中投加一定量的青霉素或鏈霉素能抑制細菌的生長，而有利于霉菌的分離。

參考資料來源：搜狗百科-菌種分離

4.“細菌培養(yǎng)”的具體培養(yǎng)步驟是什么

以光合細菌培養(yǎng)方法為例。光合細菌培養(yǎng)的方法，按次序分為容器、工具的消毒， 培養(yǎng)基的制備，接種和培養(yǎng)管理四個步驟。

（一）容器、工具的消毒參考、此處從略。

（二）培養(yǎng)基的制備

1.培養(yǎng)用水

如果培養(yǎng)的光合細菌是淡水種，菌種培養(yǎng)可用蒸餾水，生產(chǎn)培養(yǎng)可用消毒的自來水（或井水）配制。如果培養(yǎng)的光合細菌是海水種，則用天然海水配制培養(yǎng)基，注意在海水中加入磷元素時，不能用 磷酸氫二鉀，應用 磷酸二氫鉀，不然會產(chǎn)生大量沉淀。

2.滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養(yǎng)可把配好的培養(yǎng)液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉淀砂濾后的水用漂白粉（或漂白液）消毒后使用。

3. 培養(yǎng)基配制根據(jù)所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量，逐一溶解，混合，配成培養(yǎng)基。也可先配成母液，使用時按比例加入一定的量即可。

（三）接種培養(yǎng)基配好后，應立即進行接種。光合細菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的按種量比較高，一般為20%~50%，即菌種 母液量和新配 培養(yǎng)液雖之比為1∶4~1∶1，不應低于20%，尤其是微氣培養(yǎng)，接種量更應高些，否則光合細菌在培養(yǎng)液中很難占絕對優(yōu)勢，影響培養(yǎng)的最終產(chǎn)量和質(zhì)量。

（四）培養(yǎng)管理光合細菌的培養(yǎng)過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問題的分析處理等三個方面。

根據(jù)臨床初步診斷及待檢細菌的種類，可選用不同環(huán)境條件進行培養(yǎng)。常用的有需氧培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。為了提高檢驗的正確率，同一標本常同時采用兩種或三種不同的培養(yǎng)法。

（一）需氧培養(yǎng)法

本法是臨床細菌室最常用的培養(yǎng)方法，適于一般需氧和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。將已接種好的平板、斜面和液體培養(yǎng)基等，置于35℃溫箱中孵育18~24h，一般細菌可于培養(yǎng)基上生長，但有些難以生長的細菌需培養(yǎng)更長的時間才能生長。另外，有的細菌最適生長溫度是28℃~30℃，如鼠疫耶爾森菌，甚至在4℃也能生長，如李斯特菌。

（二）二氧化碳培養(yǎng)法

有些細菌初次分離培養(yǎng)時須置5%~l0%C02環(huán)境才能生長良好，如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，牛布魯菌等。常以下列方法供給C02。

1.二氧化碳培養(yǎng)箱：是一臺特制的培養(yǎng)箱，既能調(diào)節(jié)C02的含量，又能調(diào)節(jié)所需的溫度。C02從鋼瓶通過培養(yǎng)箱的C02，運送管進入培養(yǎng)箱內(nèi)，調(diào)節(jié)好所需C02，濃度自動控制器后，將接種好的培養(yǎng)基直接放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可。此法適于大型實驗室應用。

2.燭缸法：將已接種好的培養(yǎng)基置干燥器內(nèi)，并放入點燃的蠟燭。干燥器蓋的邊緣涂上凡士林，蓋上蓋子，燭光經(jīng)幾分鐘后自行熄滅，此時干燥器內(nèi)C02含量約占5%~l0%，然后將干燥器放入35℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)時間一般為18~24h，少數(shù)菌種需培養(yǎng)3~7天或更長。

3.化學法：按每升容積加入碳酸氫鈉0.49和濃鹽酸0.35ml的比例，分別置于容器內(nèi)。將容器連同接種好的培養(yǎng)基都放人干燥器內(nèi)，蓋緊干燥器的蓋子，傾斜容器使?jié)恹}酸與碳酸氫鈉接觸生成C02。

（三）厭氧培養(yǎng)法

適用于專性厭氧菌和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。常用的厭氧培養(yǎng)法有：①皰肉培養(yǎng)基法；②焦性沒食子酸法；③厭氧罐法；④氣袋法；⑤厭氧手套箱法。

5.細菌分離培養(yǎng)的方法有哪些

細菌分離培養(yǎng)的方法有哪些

如果是液體培養(yǎng)基，那分離起來就比較困難，要用到專門的凍干設備，還要加很多柔和的保護性物質(zhì)。 所以在一般的情況下最好的辦法是把細菌接種到固體培養(yǎng)基上，這樣長出來的菌落或菌苔就是你所要分離出的細菌了。

原理：通過在平板上劃線，將混雜的細菌在瓊脂平板表面充分的分散開，使單個細菌能固定在一點上生長繁殖，形成單個菌落，以達到分離純種的目的。若需從平板上獲取純種，則挑取一個單個菌落作純培養(yǎng)。

6.工業(yè)微生物產(chǎn)生菌的分離篩選方法有哪些

1.(1)從亞硝酸鹽含量較高的環(huán)境中采集土樣；（2）配置培養(yǎng)基，制備平板，一種僅以亞硝酸鹽作為唯一氮源（a），另一種不含任何氮源作為對照（b）;(3)將樣品適當稀釋（十倍稀釋法），涂布a平板；（4）將平板至于適當溫度條件下培養(yǎng)，觀察是否有菌落產(chǎn)生；（5）將a平板上的菌落編號并分別轉(zhuǎn)接至b平板，至于相同溫度條件下培養(yǎng)；（6）挑去在a平板上生長而不在b平板上生長的菌落，在一個新的a平板上劃線、培養(yǎng)，獲得單菌落，初步確定為可利用亞硝酸鹽作為唯一氮源的微生物除培養(yǎng)

2.a將他們混合培養(yǎng)，在培養(yǎng)基上長出的菌落為重組菌株。b如果在混合培養(yǎng)期間加入dnaase，在培養(yǎng)基上無重組菌落出現(xiàn)這說明上述重組是因細胞間的接觸轉(zhuǎn)化所致；如果仍有重組菌落長生，說明可能是由于接合和轉(zhuǎn)導所致。c利用只能持留細菌的濾板相隔的u型管進行試驗，如果在基本培養(yǎng)基上不產(chǎn)生重組菌落，則判斷為接合作用，如果產(chǎn)生重組菌落，則又有兩種可能，即轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導。d利用能持留細菌和細菌病毒而不能持留dna的濾板相隔的u型管進行試驗，如果不產(chǎn)生重組菌落則為轉(zhuǎn)導，如果仍產(chǎn)生重組菌落則為轉(zhuǎn)化