細菌快速鑒定方法(細菌鑒定辦法,詳細些哦~~)
1.細菌鑒定辦法有哪些,詳細些哦~~
一 淀粉水解試驗 （一）實(shí)驗原理 細菌對大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶將大分子物質(zhì)分解。
胞外酶能分泌擴散到細胞外，將物質(zhì)分解成小單位如糖、氨基酸、甘油與脂肪酸。這些小單位的物質(zhì)能被細菌吸收和利用。
水解過(guò)程可通過(guò)底物的變化來(lái)證明，如細菌水解淀粉的區域，用碘測定不再產(chǎn)生藍色；水解明膠可觀(guān)察到明膠被液化；脂肪水解后產(chǎn)生脂肪酸改變培養基的pH，其中的中性紅指示劑使培養基從淡紅色變?yōu)樯罴t色。（二）實(shí)驗方法 將淀粉培養基溶化后，冷至45℃左右，以無(wú)菌操作制成平板。
取18-24h的純培養物點(diǎn)于平板上，每皿可點(diǎn)種3-5個(gè)菌株，適溫培養2-4d，形成菌落后，在平板上滴加盧戈氏碘液，以鋪滿(mǎn)菌落周?chē)鸀槎龋桨宄伤{色。如果菌落周?chē)袩o(wú)色透明圈出現，說(shuō)明淀粉已經(jīng)被水解，實(shí)驗為陽(yáng)性，否則為陰性。
透明圈的大小一般說(shuō)明水解淀粉的能力。（三）實(shí)驗試劑的配制 肉湯蛋白胨瓊脂成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂17g，蒸餾水1000mL,pH7.2。
淀粉培養基制法：在肉湯蛋白胨瓊脂中添加0.2%的可溶性淀粉，校正pH值至7.6，分裝三角瓶，121℃ 20min滅菌備用。盧戈氏（Lugol）碘液：碘片1g，碘化鉀2g，蒸餾水300ml，先將碘化鉀溶解在少量水中，再將碘片溶解在碘化鉀溶液中，混勻，定容。
二 糖發(fā)酵試驗（一）實(shí)驗原理 單糖發(fā)酵是將葡萄糖，乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養基內，使其最終濃度為0.75-1%。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管，制成單糖發(fā)酵管，接種細菌經(jīng)37℃培養18-24小時(shí)，若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃，若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成，小倒管內則聚集有氣泡；不分解，則指示劑不變色。
（二）實(shí)驗材料 1.菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌18-24小時(shí)瓊脂斜面培養物。 2.培養基：葡萄糖發(fā)酵管，乳糖發(fā)酵管等。
（三）實(shí)驗方法1.將傷寒桿菌，大腸桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內。 2.置37℃孵箱培養18-24小時(shí)。
3.觀(guān)察結果：由于一些細菌能分解某種糖類(lèi)產(chǎn)酸，所以培養基中pH下降到7.0以下，在酚紅指示劑的顯示下，培養基顏色由紅變黃。產(chǎn)酸者以“+”表示，如果同時(shí)產(chǎn)生氣體，則培養基中小倒管內有氣泡出現，此乃產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，以“⊕”表示，不分解，則指示劑不變色，用“-”表示。
（四）實(shí)驗結果 傷寒桿菌 大腸桿菌 葡萄糖 + ⊕ 乳 糖 - ⊕ （五）實(shí)驗試劑的配制1.單糖發(fā)酵管的制備： 成分：蛋白胨水培養基 100ml ,0.2%酚紅 1ml ，所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g 制法： （1）將上述成分溶化，混勻分裝于內含有倒置小玻璃管的小試管中，每管約2ml，加塞。 （2）小倒管排氣，滅菌（8-10磅，20-30分鐘），貯存備用。
用途：供單糖發(fā)酵試驗用。 2.0.2%酚紅配制法 酚紅（phenol red）0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ，蒸餾水 92ml 將酚紅入研缽徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨，再補足蒸餾水即成。
若需長(cháng)時(shí)間保存，可高壓滅菌后貯存備用。 三 甲基紅（M.R）試驗（一）實(shí)驗原理 某些細菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養基pH值降至4.5以下，加入甲基紅指示劑呈紅色，此為陽(yáng)性反應；若產(chǎn)酸量少或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉化為醇、醛、氣體和水等，則培養基的酸堿度仍在pH 6.2以上，加入甲基紅指示劑呈現黃色，為陰性反應。
（二）實(shí)驗材料1. 菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌18-24h瓊脂斜面培養物。 2. 培養基：葡萄糖蛋白胨水培養基。
3. 試劑：甲基紅試劑。 （三）實(shí)驗方法1. 分別將大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養基中。
2. 置37℃培養2-3天取出，分別滴加甲基紅試劑2-3滴，混勻，觀(guān)察結果。 （四）實(shí)驗結果 大腸桿菌：+，產(chǎn)氣桿菌：-。
（五）實(shí)驗試劑的配制1.甲基紅試劑的配制 甲基紅 0.04g, 95%酒精 60ml ， 蒸餾水 40ml 。先使甲基紅溶解于酒精中，再加入蒸餾水，混合，搖勻即成。
2.葡萄糖蛋白胨水培養物 成分：蛋白胨5g 葡萄糖5g 制法： （1）將上述成分溶解于蒸餾水中。 （2）調節pH至7.6，用濾紙過(guò)濾除渣。
（3）分裝中試管，每管約3-4ml，滅菌后備用。 用途：供甲基紅及V-P試驗用。
四 產(chǎn)吲哚（indole）試驗（一）實(shí)驗原理 某些細菌如大腸桿菌，變形桿菌等具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水培養基中的色氨酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)（無(wú)色吲哚），再與歐立希試劑（對二甲基氨基苯甲醛）反應，形成紅色化合物—玫瑰吲哚，即為陽(yáng)性反應。 （二）實(shí)驗材料1. 菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌18-24小時(shí)瓊脂斜面培養物。
2. 培養基：蛋白胨水培養基。 3. 試劑，歐立希（Ehrlich）試劑（對二甲基氨基苯甲醛） （三）實(shí)驗方法1. 分別將大腸桿菌，傷寒桿菌接種于兩支蛋白胨水培養基中。
2. 置37℃培養2-3天后，每管沿管壁各加歐立希試劑0.5-1ml于培養液面上，待1-2分鐘后觀(guān)察結果：在交界面出現玫瑰紅色環(huán)即為吲哚試驗陽(yáng)性，無(wú)紅色環(huán)即為陰性。 （四）實(shí)驗結果 大腸桿菌：+ ；傷寒桿菌：- 。
（五）實(shí)驗試劑的配制1.蛋白胨水培養基的制備 成分：蛋白胨10g 氯化鈉5g 蒸餾水1000ml 制法： （1）先用少量蒸餾水將蛋白胨和氯化鈉相混合溶解，再加足蒸餾水量。 。
2.細菌鑒定辦法有哪些,常見(jiàn)細菌的鑒定辦法就可以
細菌的鑒定通過(guò)分離培養獲得的病原菌，必須達到不含有其他微生物的純培養程度，才能進(jìn)行系統鑒定。
系統鑒定就是通過(guò)病原菌的形態(tài)結構、生長(cháng)特性、抗原性和病原性等檢測，并用已知標準免疫血清確定分離細菌的屬、種和型。微生物鑒定的程序通常是根據其形態(tài)，生長(cháng)、生化特性等定種，最后根據抗原的免疫血清學(xué)檢查定型。
（一）形態(tài)學(xué)檢查 各種細菌的形態(tài)，在適宜的環(huán)境下是相對穩定的。但環(huán)境的改變，如培養基條件的改變，抗生素和化學(xué)藥品的作用等，均可使細菌產(chǎn)生不規則的形態(tài)，并可出現細胞壁的缺陷和多樣性。
為此，在作細菌形態(tài)鑒定時(shí)，必須按被檢菌的生長(cháng)要求，選擇適宜的培養基和培養條件，以及適宜的培養時(shí)間和檢查方法，才能作出正確的形態(tài)學(xué)鑒定。形態(tài)學(xué)檢查一般包括二方面：肉眼觀(guān)察和顯微鏡檢查。
1.肉眼觀(guān)察 肉眼觀(guān)察主要觀(guān)察細菌在固體、液體、半固體，鑒別培養基上的生長(cháng)情況。在固體培養基上要觀(guān)察菌落形態(tài)、大小、顏色是否均勻一致，表面是光滑濕潤，還是干燥無(wú)光或呈皺紋狀，邊緣是整齊還是不規則，菌落是隆起、扁平，還是乳頭樣，是透明、半透明或不透明。
在液體培養基中，要觀(guān)察培養基是否呈均勻渾濁，管底有無(wú)沉淀，液面有無(wú)菌膜，是否產(chǎn)氣等。在半固體培養基上應觀(guān)察細菌是否沿著(zhù)接種線(xiàn)生長(cháng)，是呈毛刷樣生長(cháng)還是均勻生長(cháng)，上下生長(cháng)是否一致。
在鑒別培養基上，應觀(guān)察其生長(cháng)情況是否與預期的相一致，在血瓊脂培養基上還要觀(guān)察是否溶血及溶血圈的特點(diǎn)，在某些培養基上還要注意是否有臭味等。2.顯微鏡觀(guān)察 在作細菌個(gè)體形態(tài)學(xué)檢查時(shí)，要根據被檢菌的種類(lèi)和檢查項目，選用相應的染色方法，同時(shí)要注意選擇適合的培養基以及細菌培養的時(shí)間，才能達到預期的目的。
一般以18-24小時(shí)（生長(cháng)時(shí)間長(cháng)的細菌除外）的幼嫩培養菌為宜。例如，作革蘭氏染色檢查時(shí)，培養時(shí)間長(cháng)的陳舊細菌，可能由陽(yáng)性變?yōu)殛幮浴?/p>
作細菌運動(dòng)性檢查時(shí)，液體培養基的幼嫩培養物（幾小時(shí)到十幾小時(shí)）最為適宜。作炭疽莢膜染色時(shí)，因炭疽桿菌在一般培養基上不形成莢膜，而在動(dòng)物體內形成明顯的莢膜，因此，應先接種小鼠，取死亡動(dòng)物的病料作涂片標本鏡檢。
作鞭毛染色時(shí)，以液體培養基為宜。芽胞的形成，因細菌種類(lèi)不同，往往對培養條件如培養基、空氣和培養時(shí)間等而異，但一般均要求較長(cháng)時(shí)間。
鏡檢時(shí)除注意其基本形態(tài)結構和大小（要用測微計測量）外，還應注意其排列狀態(tài)、菌端形狀、有無(wú)兩極染色、有無(wú)形成芽胞和莢胞等。必要時(shí)可用電鏡觀(guān)察其微細結構。
3.常用的幾種染色方法 涂片用的載玻片需用清潔液洗凈、擦干、不留油質(zhì)，否則培養物不能均勻地推開(kāi)。被檢材料如果是肉湯培養物，用鉑金耳環(huán)取一滴，均勻涂抹于載玻片上，涂抹的范圍約有手指甲大即可。
隨后，在酒精燈火焰上加熱使之固定（即火焰固定）；被檢材料如果是固體培養物，先滴一滴水（常用生理鹽水）于載玻片上，用鉑金耳環(huán)取少許培養物，在水滴中混勻，培養物不宜太多，菌體看不清楚。膿汁、淋巴液、乳汁也按同樣方法制備抹片。
血液和病變組織，直接涂抹在載玻片上，組織抹片也不能太厚，否則看不見(jiàn)細菌，細菌培養物抹片用火焰固定，組織抹片常用甲醇或甲醛固定。
3.細菌分子鑒定的方法有哪些
一般從DNA、RNA和蛋白質(zhì)這三個(gè)方面鑒定。將三種物質(zhì)分別提取出來(lái)，各自進(jìn)行鑒定。鑒定的方法可以用你提到的這些。
1.核酸雜交：簡(jiǎn)單的說(shuō)，就是將需檢測的核酸與標記的分子結合使得未知核酸可以被檢測到。
2.脈沖場(chǎng)凝膠電泳：利用電場(chǎng)讓不同大小的帶電DNA分子以不同的速度移動(dòng)，從而將不同大小的分子分開(kāi)。可分離10kb--10mb的DNA分子。
3.16S rRNA :16S rRNA所對應的 16S rDNA基因在微生物基因組中具有高度保守性；對16S rDNA而言，如果出現3個(gè)堿基以上的差異就可以斷定細菌不屬于同一種屬。它具有高度的靈敏性，而且不需要培養，檢測指標也很單一。可以快速檢測未知微生物或致病微生物。
4.RAPD：對整個(gè)未知序列的基因組進(jìn)行多態(tài)性分析的分子技術(shù)。先進(jìn)行PCR擴增，然后電泳分離染色，在紫外透視儀上檢測多態(tài)性。
5.質(zhì)粒質(zhì)譜分析法：我只了解過(guò)蛋白質(zhì)的質(zhì)譜分析技術(shù)，質(zhì)粒的沒(méi)有了解過(guò)。
蛋白質(zhì)：將蛋白質(zhì)酶解成小肽段并混合基質(zhì)，用激光將呈離子化氣體狀態(tài)的待測物噴射，經(jīng)電場(chǎng)到達檢測器，根據到達的時(shí)間分析肽段的分子質(zhì)量。
4.細菌的鑒定方法
一淀粉水解試驗：
細菌對大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶將大分子物質(zhì)分解。胞外酶能分泌擴散到細胞外，將物質(zhì)分解成小單位如糖、氨基酸、甘油與脂肪酸。這些小單位的物質(zhì)能被細菌吸收和利用。水解過(guò)程可通過(guò)底物的變化來(lái)證明，如細菌水解淀粉的區域，用碘測定不再產(chǎn)生藍色；水解明膠可觀(guān)察到明膠被液化；脂肪水解后產(chǎn)生脂肪酸改變培養基的pH，其中的中性紅指示劑使培養基從淡紅色變?yōu)樯罴t色。
二糖發(fā)酵試驗：
單糖發(fā)酵是將葡萄糖，乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養基內，使其最終濃度為0.75-1%。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管，制成單糖發(fā)酵管，接種細菌經(jīng)37℃培養18-24小時(shí)，若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃，若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成，小倒管內則聚集有氣泡；不分解，則指示劑不變色。
三甲基紅（M.R）試驗：
某些細菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養基pH值降至4.5以下，加入甲基紅指示劑呈紅色，此為陽(yáng)性反應；若產(chǎn)酸量少或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉化為醇、醛、氣體和水等，則培養基的酸堿度仍在pH 6.2以上，加入甲基紅指示劑呈現黃色，為陰性反應。
四產(chǎn)吲哚（indole）試驗等等，
這要你鑒定的細菌是什么分類(lèi)了。
請采納！
5.鑒別細菌的五種方法
細菌鑒定是指將未知細菌按生物學(xué)特征放入系統中某一適當位置和已知菌種比較其相似性，并通過(guò)對比分析方法確定細菌分類(lèi)地位的過(guò)程。
細菌鑒定方法包括生化鑒定、核酸檢測、血清學(xué)鑒定、自動(dòng)化儀器鑒定及質(zhì)譜技術(shù)等。細菌鑒定步驟在實(shí)驗室中，主要是根據所用的鑒定儀器特點(diǎn)、感染性疾病的類(lèi)型、標本種類(lèi)、采集部位等因素建立具體的微生物學(xué)檢驗程序。
大致步驟如下。細菌鑒定方法1.生化鑒定是細菌鑒定中最重要的一種，主要是借助細菌對營(yíng)養物質(zhì)分解能力的不同及其代謝產(chǎn)物的差異對細菌進(jìn)行鑒定，包括蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物試驗、觸酶試驗、糖分解產(chǎn)物試驗、氧化酶試驗、凝固酶試驗等。
2.血清學(xué)鑒定適用于含較多血清型的細菌，常用方法是玻片凝集試驗，并可用免疫熒光法、協(xié)同凝集試驗、對流免疫電泳、間接血凝試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等方法快速、靈敏地檢測樣本中致病菌的特異性抗原。用已知抗體檢測未知抗原（待檢測的細菌），或用已知抗原檢測患者血清中的相應抗細菌抗體及其效價(jià)。
血清學(xué)鑒定操作簡(jiǎn)單快速，特異性高，可在生化鑒定基礎上為細菌鑒定提供確定診斷。3.分子生物學(xué)檢測適用于人工培養基不能生長(cháng)、生長(cháng)緩慢及營(yíng)養要求高不易培養的細菌，檢測方法包括核酸擴增技術(shù)、核酸雜交、生物芯片及基因測序等。
常見(jiàn)的核酸擴增技術(shù)有聚合酶鏈反應、連接酶鏈反應等，主要用于耐甲氧西林、結核分枝桿菌等病原菌的檢測。核酸雜交有斑點(diǎn)雜交、原位雜交等，用于致病性大腸埃希菌、沙門(mén)菌、空腸彎曲菌等致病菌的檢測。
生物芯片包括基因芯片和蛋白質(zhì)芯片，主要是對基因、蛋白質(zhì)、細胞及其他生物進(jìn)行大信息量分析的檢測技術(shù)。4.微生物自動(dòng)鑒定系統鑒定可快速、準確地對臨床近千種常見(jiàn)分離菌進(jìn)行鑒定，目前已在臨床實(shí)驗室廣泛使用。
其中，細菌16S rRNA編碼基因已成為較理想的基因分離靶序列，逐漸成為臨床細菌鑒定、分離的金標準。5.質(zhì)譜技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型的軟電離生物質(zhì)譜，用于分析細菌的化學(xué)分類(lèi)和鑒定，具有高靈敏度和高質(zhì)量檢測范圍的優(yōu)點(diǎn)。
主要是對核酸、蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行分析。
6.細菌的鑒定方法
去百度文庫，查看完整內容> 內容來(lái)自用戶(hù)：李長(cháng)漢 1.2.1形態(tài)學(xué)特征按照東秀珠和蔡妙英編《常見(jiàn)細菌系統鑒定手冊》（1999），中科院微生物所編著(zhù)《一般細菌常用鑒定方法》（1978）的方法進(jìn)行鑒定。
芽孢桿菌屬鑒定到種，參照了蔡妙英等譯《芽孢桿菌屬》（1980）的方法。（1）革蘭氏染色：挑選少許菌苔，涂布于干凈玻片的蒸餾水中，風(fēng)干固定，結晶紫染色（結晶紫2g，草酸銨0.8g,95%乙醇20 ml，加水至100 ml）1min，水洗后碘液（碘1g，碘化鉀2g，水300 ml）作用1min，水洗，脫色，用番紅O液染3min，水洗，風(fēng)干，光學(xué)顯微鏡觀(guān)察。
（2）鞭毛染色：將16~24h菌齡的菌苔在載玻片上的水滴中輕蘸幾下，將玻片傾斜，使菌液緩慢流到另一端，然后平放在空氣中干燥。干燥后滴甲液（丹寧酸5g,FeCl31.5g,15%福爾馬林2ml,1%NaOH 1ml，蒸餾水100 ml）染6~10min，水洗，干燥后，用乙液（2%AgNO3溶液）加熱復染30min，蒸餾水沖洗，干燥，鏡檢，菌體為深褐色，鞭毛為褐色。
（3）運動(dòng)性：半固體瓊脂穿刺法，將菌種接在可使鑒定菌生長(cháng)良好的培養基中，其中含0.3~0.6%的瓊脂。適溫培養，運動(dòng)性可用透射光目測，如生長(cháng)菌只生長(cháng)在穿刺線(xiàn)上，邊緣十分清晰，則表明鑒定菌無(wú)運動(dòng)性；如生長(cháng)菌由穿刺線(xiàn)向四周呈云霧狀擴散，其邊緣呈云霧狀，則表示鑒定菌有運動(dòng)性。
（4）芽孢染色：孔雀綠染色法。按革蘭氏染色涂片后，用飽和的孔雀綠水溶液（約1.2.2(。
