研究水中微生物的方法(水中常見(jiàn)的微生物)
1.水中常見(jiàn)的微生物有哪些
水中常見(jiàn)的微生物有細(xì)菌、真菌、噬菌體、病毒、原生動(dòng)物、藻類(lèi)等。
1、細(xì)菌
細(xì)菌（學(xué)名：Bacteria）是生物的主要類(lèi)群之一，屬于細(xì)菌域。也是所有生物中數(shù)量最多的一類(lèi)，據(jù)估計(jì)，其總數(shù)約有5*10^30個(gè)。細(xì)菌的形狀相當(dāng)多樣，主要有球狀、桿狀，以及螺旋狀。
2、真菌
真菌，是一種真核生物。最常見(jiàn)的真菌是各類(lèi)蕈類(lèi)，另外真菌也包括霉菌和酵母。現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了七萬(wàn)多種真菌，估計(jì)只是所有存在的一小半。大多真菌原先被分入動(dòng)物或植物，現(xiàn)在成為自己的界，分為四門(mén)。
3、噬菌體
噬菌體（phage）是侵襲細(xì)菌的病毒，也是賦予宿主菌生物學(xué)性狀的遺傳物質(zhì)。噬菌體必須在活菌內(nèi)寄生，有嚴(yán)格的宿主特異性，其取決于噬菌體吸附器官和受體菌表面受體的分子結(jié)構(gòu)和互補(bǔ)性。噬菌體是病毒中最為普遍和分布最廣的群體。通常在一些充滿(mǎn)細(xì)菌群落的地方，如：泥土、動(dòng)物的腸道里，都可以找到噬菌體。
4、原生動(dòng)物
原生動(dòng)物是單細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)有特化的各種胞器，具有維持生命和延續(xù)后代所必需的一切功能，如行動(dòng)、營(yíng)養(yǎng)、呼吸、排泄和生殖等。每個(gè)原生動(dòng)物都是一個(gè)完整的有機(jī)體。
5、藻類(lèi)
藻類(lèi)是原生生物界一類(lèi)真核生物（有些也為原核生物，如藍(lán)藻門(mén)的藻類(lèi)）。主要水生，無(wú)維管束，能進(jìn)行光合作用。體型大小各異，小至長(zhǎng)1微米的單細(xì)胞的鞭毛藻，大至長(zhǎng)達(dá)60公尺的大型褐藻。一些權(quán)威專(zhuān)家繼續(xù)將藻類(lèi)歸入植物或植物樣生物，但藻類(lèi)沒(méi)有真正的根、莖、葉，也沒(méi)有維管束。這點(diǎn)與苔蘚植物（bryophyte）相同。
2.測(cè)定水中微生物（包括細(xì)菌真菌等）數(shù)量的方法
器材及培養(yǎng)
材料和試劑
蒸餾水， 自來(lái)水， 取自?xún)和珗@的湖水， 牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基.
儀器或其他用具
滅菌三角燒瓶， 滅菌帶玻璃塞瓶， 滅菌培養(yǎng)皿， 滅菌吸管， 滅菌量筒.
研究方法
采用平板菌落記數(shù)技術(shù)測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù).
水樣的采取
自來(lái)水
先將自來(lái)水水龍頭用火焰灼燒3 min 滅菌， 再開(kāi)放水龍頭5 min 后， 以滅菌三角燒瓶接取水樣， 以待分析.
公園的湖水
應(yīng)取距水面10~ 15 cm 的深層水樣， 先將滅菌的帶玻璃塞瓶， 瓶口向下浸入水中， 然后翻過(guò)來(lái)， 除去玻璃
塞， 水即流入瓶中， 盛滿(mǎn)后， 將瓶塞蓋好， 再?gòu)乃腥〕觯?最好立即檢查， 否則需放入冰箱中保存.
細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定
自來(lái)水
Step 1 用滅菌吸管吸取1 mL 水樣， 注入滅菌培養(yǎng)皿中. 共做兩個(gè)平皿.
Step 2 分別傾注約15 mL 已溶化并冷卻到45 e 左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基. 并立即在桌上做平面
旋搖， 使水樣與培養(yǎng)基充分混勻.
Step 3 另取一個(gè)空的滅菌培養(yǎng)皿， 傾注肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基15 mL， 作對(duì)照.
Step 4 培養(yǎng)基凝固后， 倒置與37 e 溫箱中， 培養(yǎng)24 h， 進(jìn)行菌落記數(shù).
公園的湖水
Step 1 稀釋水樣， 取三個(gè)滅菌空試管， 分別加入9 mL 滅菌水. 取1 mL 水樣注入第一管9 mL 滅菌水
內(nèi)， 搖勻， 再自第一管取1 mL 到下一管滅菌水內(nèi)， 如此稀釋到第三管， 稀釋度分別為10- 1 , 10- 2 , 10- 3 .
Step 2 自最后三個(gè)稀釋度的試管中各取1 mL 稀釋水加入空的滅菌培養(yǎng)皿， 每一稀釋度共做兩個(gè)培養(yǎng)皿.
Step 3 各傾注15 mL 已溶化并冷卻到45 e 左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基并立即在桌上搖勻.
Step 4 凝固后倒置于37 e 恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h.
菌落記數(shù)方法
1） 計(jì)算相同稀釋度的平均菌落數(shù). 若有大片菌苔生長(zhǎng)時(shí)， 棄用； 以無(wú)片菌苔生長(zhǎng)的培養(yǎng)皿記數(shù). 若片狀菌
苔大小不到培養(yǎng)皿的一半， 其余一半分布均勻， 將此一半計(jì)數(shù)@ 2.
2） 選擇平均菌落數(shù)在30~ 300 之間的平板. 只有一個(gè)符合此范圍時(shí)， 以該平均菌落數(shù)@ 稀釋倍數(shù). 有兩
個(gè)在30~ 300 之間時(shí)， 按兩者菌落總數(shù)比值決定， 比值小于2， 取平均； 比值大于2， 取較小的菌落數(shù).
3） 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300， 則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)@ 稀釋倍數(shù).
4） 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30， 則按稀釋度的平均數(shù)@ 倍數(shù).
5） 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30~ 300 之間， 則以最近30 或300 的平均菌落數(shù)@ 稀釋倍數(shù).
微生物的含量能否反應(yīng)水的營(yíng)養(yǎng)化程度？
能
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3.水中的微生物有哪些
自然界的水可分為地下水和地面水，除了地下深層水外，如湖泊，河流，海洋等各種地面水中都存在著各種各樣的微生物。但它們所含的微生物種類(lèi)，數(shù)量和分布都不相同。
其中有些是“土生土長(zhǎng)”的，例如自養(yǎng)菌中的硫磺細(xì)菌，硝化細(xì)菌，鐵細(xì)菌，光合細(xì)菌等。異養(yǎng)菌中的假單胞桿菌，放線菌，真菌，原生動(dòng)物及藻類(lèi)。在水生細(xì)菌中革蘭氏陰性桿菌最多（占95%），陽(yáng)性菌占4%，而球菌只占1%。
另一些水生細(xì)菌是外來(lái)的，它們來(lái)自土壤，空氣，垃圾，工廠廢物或城市下水道污水。來(lái)自前兩者的微生物一般都是腐生性的，而來(lái)自下水道的微生物中，
4.如何觀察水中的微生物,實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)
熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到 60 ℃以下 再開(kāi)蓋取物，以防突然減壓液 體劇烈沸騰或容器爆破。
（3） 臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進(jìn)行： ① 關(guān)緊鍋門(mén)，打開(kāi)進(jìn)氣閥，將蒸氣引入夾層進(jìn)行預(yù)熱，夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動(dòng) 排出。 ② 夾層達(dá)到預(yù)定溫度后，打開(kāi)鍋室進(jìn)氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室 阻氣器自動(dòng)排出。
③ 待鍋室達(dá)到規(guī)定的壓力與溫度時(shí)，調(diào)節(jié)進(jìn)氣閥，使保持恒定至 ④ 自然或人工降溫至 60 ℃再開(kāi)門(mén)取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防突然降壓， 液體劇烈沸騰或容器爆破。 ⑤ 使用自動(dòng)程序控制式壓力蒸氣滅菌器，在放好物品關(guān)緊門(mén)后，應(yīng)根據(jù)物品類(lèi)別按 動(dòng)相應(yīng)開(kāi)關(guān)， 以便按要求程序自動(dòng)進(jìn)行滅菌， 滅菌時(shí)必須利用附設(shè)儀表記錄溫度與時(shí)間以 備查，操作要求應(yīng)嚴(yán)格按照廠家說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
5 .滅菌溫度與時(shí)間 （1） 干熱滅菌器滅菌溫度 160 ℃， 1.5-2h 。 (2) 壓力蒸氣滅菌 鍋滅菌溫度與時(shí)間 （二）間歇滅菌方法 1. 滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸氣滅菌容易破壞，可用此 法滅菌。
（ 1 ）將欲滅菌物品置于鍋內(nèi)，蓋上頂蓋，打開(kāi)排水口，使器內(nèi)余水排盡。 （ 2 ）關(guān)閉排水口，打開(kāi)進(jìn)氣門(mén)，根據(jù)需要消毒 10 ~ 20min 。
( 3 )滅菌完畢關(guān)閉進(jìn)氣門(mén)，取出物品待冷至室溫溫度，放入 37 ℃溫箱過(guò)夜，次日仍 按上述方法消毒，如此三次，即可達(dá)到滅菌目的。 2 .血清凝固器使用方法，培養(yǎng)基中含有血清或雞蛋特殊成份時(shí)，因高熱會(huì)破壞其營(yíng) 養(yǎng)成份，故用低溫，可使血清凝固，又可達(dá)到滅菌目的。
（1） 在使用該法滅菌的血清等分裝時(shí)，需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，試管、平皿也經(jīng)滅菌后 使用。 （2） 將培養(yǎng)基按要求使成斜面或高層， 加足水后， 接上電源， 升溫 75 ~ 90 ℃ 1h 滅菌， 放 37 ℃溫箱過(guò)夜，再如此滅菌三次。
3 .煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮 5 ~ 15 min ，也可在水中加入 2 ﹪石炭酸煮沸 5 min ，加入 0.02 ﹪甲醛 ， 80 ℃煮 60 min 均可達(dá)到滅菌目的 ， 但選用 煮沸消毒的增消劑時(shí) ， 應(yīng)注意對(duì)物品的腐蝕性 . 4 .滅菌處理 ： 滅菌后物品 ， 按正常情況已屬無(wú)菌 ， 從滅菌器中取出應(yīng)仔細(xì)檢查放置 ， 以免 再度污染。 （1） 物品取出 ， 隨即檢查包裝的完整性 ， 若有破壞或棉塞脫掉 ， 不可作為無(wú)菌物品使用。
（2） 取出的物品 ， 如為包裝有明顯的水浸者 ， 不可作為無(wú)菌物品使用。 （3） 培養(yǎng)基或試劑等 ， 應(yīng)檢查是否符合達(dá)到滅菌后的色澤或狀態(tài) ， 未達(dá)到者應(yīng)廢棄。
（4） 啟閉式容器 ， 在取出時(shí)應(yīng)將篩孔關(guān)閉。 （5） 取出的物品掉落在地或誤放不潔這處 ， 或沾有水液 ， 均視為受到污染 ， 不可作為無(wú) 菌物品使用。
（6） 取出的合格滅菌物品 ， 應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi) ， 嚴(yán)禁與未滅菌物品混放。 （7） 凡屬合格物品 ， 應(yīng)標(biāo)有滅菌日期及有效期限。
（8） 每批滅菌處理完成后 ， 記錄滅菌品名、數(shù)量、溫度、時(shí)間、操作者。 四、有毒有菌污物處理要求 微生物實(shí)驗(yàn)所用實(shí)驗(yàn)器材、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理，一律不得帶出實(shí)驗(yàn)室。
1. 經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴(yán)密的容器或鐵絲筐內(nèi)，并集中存放在指定地 點(diǎn)，待統(tǒng)一進(jìn)行高壓滅菌。 2. 經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物，必須經(jīng) 121 ℃ 30min 高壓滅菌。
3. 染菌后的吸管，使用后放入 5 ﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡 24h （消毒 液體不得低于浸泡的高度）再經(jīng) 121 ℃ 30 min 高壓滅菌。 4. 涂片染色沖洗片的液體，一般可直接沖入下水道，烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯 中，經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入 5 ﹪煤酚皂溶液中浸泡 24 h 后，煮 沸洗滌。
做凝集試驗(yàn)用的玻片或平皿，必須高壓滅菌后洗滌。 5. 打碎的培養(yǎng)物， 立即用 5 ﹪煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位， 浸泡半 小時(shí)后再擦拭干凈。
污染的工作服或進(jìn)行烈性試驗(yàn)所穿的工作服、帽、口罩等，應(yīng)放入專(zhuān)用消毒袋內(nèi)，經(jīng) 高壓滅菌后方能洗滌。 五、培養(yǎng)基制備要求 培養(yǎng)基制備的質(zhì)量將直接影響微生物生長(zhǎng)。
因?yàn)楦鞣N微生物對(duì)其營(yíng)養(yǎng)要求不完全相同， 培養(yǎng)目的的不同，各種培養(yǎng)基制備要求如下： 1 .根據(jù)培養(yǎng)基配方的成分按量稱(chēng)取，然后溶于蒸餾水中，在使用前對(duì)應(yīng)用的試劑藥 品應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)。 2 . PH 測(cè)定及調(diào)節(jié)： PH 測(cè)定要在培養(yǎng)基冷至室溫時(shí)進(jìn)行，因在熱或冷的情況下， 其 PH 有一定差異，當(dāng)測(cè)定好時(shí)，按計(jì)算量加入堿或酸混勻后，應(yīng)再測(cè)試一次。
培養(yǎng)基 PH 值一定要準(zhǔn)確， 否則會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)或影響結(jié)果的觀察。 但需注意因高壓滅菌可 影響一些培養(yǎng)基的 PH 降低或升高，故不宜滅菌壓力過(guò)高或次數(shù)太多，以免影響培養(yǎng)基 的質(zhì)量，指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調(diào)完 PH 后再加入。
3 .培養(yǎng)基需保持澄清，便于觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，培養(yǎng)基加熱煮沸后，可用脫脂棉 花或絨布過(guò)濾，以除去沉淀物，必要時(shí)可用雞蛋白澄清處理，所用瓊脂條要預(yù)先洗凈晾干 后使用，避免因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度。 4 .盛裝培養(yǎng)基不宜用鐵、銅等容器，使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。
5 .培養(yǎng)基的滅菌既要達(dá)到完全滅菌目的，又要注意不因加熱而降低其營(yíng)養(yǎng)。
5.水中有那些微生物
水中常見(jiàn)的微生物有細(xì)菌、真菌、噬菌體、病毒、原生動(dòng)物、藻類(lèi)等。
1、細(xì)菌
細(xì)菌（學(xué)名：Bacteria）是生物的主要類(lèi)群之一，屬于細(xì)菌域。也是所有生物中數(shù)量最多的一類(lèi)，據(jù)估計(jì)，其總數(shù)約有5*10^30個(gè)。細(xì)菌的形狀相當(dāng)多樣，主要有球狀、桿狀，以及螺旋狀。
2、真菌
真菌，是一種真核生物。最常見(jiàn)的真菌是各類(lèi)蕈類(lèi)，另外真菌也包括霉菌和酵母。現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了七萬(wàn)多種真菌，估計(jì)只是所有存在的一小半。大多真菌原先被分入動(dòng)物或植物，現(xiàn)在成為自己的界，分為四門(mén)。
3、噬菌體
噬菌體（phage）是侵襲細(xì)菌的病毒，也是賦予宿主菌生物學(xué)性狀的遺傳物質(zhì)。噬菌體必須在活菌內(nèi)寄生，有嚴(yán)格的宿主特異性，其取決于噬菌體吸附器官和受體菌表面受體的分子結(jié)構(gòu)和互補(bǔ)性。噬菌體是病毒中最為普遍和分布最廣的群體。通常在一些充滿(mǎn)細(xì)菌群落的地方，如：泥土、動(dòng)物的腸道里，都可以找到噬菌體。
4、原生動(dòng)物
原生動(dòng)物是單細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)有特化的各種胞器，具有維持生命和延續(xù)后代所必需的一切功能，如行動(dòng)、營(yíng)養(yǎng)、呼吸、排泄和生殖等。每個(gè)原生動(dòng)物都是一個(gè)完整的有機(jī)體。
