dna的提取鑒定方法(提取DNA的方法)
1.提取DNA的方法有哪些
DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來(lái).
也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時(shí)，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離.在提取過(guò)程中為抑制組織中的DNase對(duì)DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA.
(2).陰離子去污劑法：
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因?yàn)殛庪x子去污劑能夠破壞這種價(jià)鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA.
(3).苯酚抽提法：
苯酚作為蛋白變性劑，同時(shí)抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí)，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA .此時(shí)DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團(tuán)，取出.此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .
( 4).水抽提法：
利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細(xì)胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過(guò)程中加入SDS.
2.DNA的提取方法有多少種
DNA的提取方法有7種：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒纏繞法、異丙醇bai沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制du備、堿變性快速制備。
DNA的提取原則
1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；
2、核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子；
3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)zhi降低到最低程度；
4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。
擴(kuò)展資料
提取daoDNA的注意事項(xiàng)
1、各操作內(nèi)步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。
2、注意防止非核酸類成分干擾。
3、要減少DNA的降解，促進(jìn)DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA過(guò)程中所用到的試劑和器材容要通過(guò)高壓烤干等辦法進(jìn)行無(wú)核酸酶化處理。
5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
參考資料來(lái)源：百度百科-dna提取
3.DNA實(shí)驗(yàn)室常用的DNA提取方法有哪些
提取DNA主要有SDS和CTAB法，其實(shí)提取效果的好壞主要看提取的對(duì)象是什么樣的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟。
一）CTAB法
CTAB是一種去污劑，可溶解細(xì)胞膜，它能與核酸形成復(fù)合物，在高鹽溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）時(shí)，從溶液中沉淀，通過(guò)離心就可將CTAB與核酸的復(fù)合物同蛋白質(zhì)、多糖類物質(zhì)分開，然后將CTAB與核酸的復(fù)合物沉淀溶解于高鹽溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。
（二）SDS法
利用高濃度的SDS，在較高溫度（55—65℃）條件下裂解細(xì)胞，使染色體離析，蛋白質(zhì)變性，釋放出核酸，然后采用提高鹽濃度及降低溫度的做法使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀（最常用的是加入5M的KAc于冰上保溫，在低溫條件下KAc與蛋白質(zhì)及多糖結(jié)合成不溶物），離心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反復(fù)抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
以下是在提取熱帶水果DNA時(shí)設(shè)計(jì)的兩種不同方法步驟，對(duì)比起來(lái)CTAB法好，在禾本科植物效果差不多！
1、CTAB法
1） 在所需量的CTAB抽提液中加入2-巰基乙醇，使終濃度達(dá)2%(v/v)。將此溶液預(yù)熱至65℃。
對(duì)于每克新鮮的葉組織大約需要4ml的2-ME/CTAB抽提液。
2） 用液氮（-196℃）或干冰（-78℃）冷卻粉碎器/勻漿器，將0.5 g植物組織粉碎成細(xì)粉，然后將組織轉(zhuǎn)移到2.0 ml離心管。
3） 加入800 μl預(yù)熱的2-Me/CTAB，混合使之充分濕潤(rùn)，于65℃溫育20 min，不時(shí)顛倒混勻。
4） 待冷至室溫后，加入800 μl氯仿/異戊醇（24:1），顛倒混勻至溶液呈乳濁狀----但不要振蕩。25℃，10000 rpm離心10 min。
5） 上清（~700 μl）轉(zhuǎn)移至另一干凈的離心管中，加入5 μl RNaseA貯液，37℃溫育30 min。
6） 加入700 μl氯仿/異戊醇，顛倒混勻，25℃，10000 rpm離心10 min。
7） 上清（~600 μl）轉(zhuǎn)移至另一干凈的1.5 ml離心管中，加入600 μl異丙醇，顛倒混勻，室溫或-20℃放置20 min。
8) 25℃，12000 rpm，離心10 min，收集沉淀。
9） 去上清，加1 ml70%乙醇洗滌沉淀兩次。（25℃，12000 rpm，離心10 min）
10）涼干DNA，溶于50 μl ddH2O,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2、SDS法
① 將0.3 g植物材料于液氮速凍，然后在研缽中將其磨碎，將粉末轉(zhuǎn)至2 ml離心管中。
② 加入1.2 ml預(yù)熱至65℃的提取緩沖液（其中加入3 μl β—巰基乙醇，增加DNA的穩(wěn)定性），置65℃水浴中放置30分鐘，不時(shí)顛倒混勻。
③ 加入0.45 ml 5M的醋酸鉀，混勻，冰浴20分鐘，在10000 rpm離心20 min。需要的話，Miracloth紗布過(guò)濾除去沉淀，上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中。
④ 加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），輕輕顛倒混勻，12000 rpm離心15 min。
⑤ 轉(zhuǎn)移上清液到另一新離心管中，加5 μl RNaseA貯液，37℃溫育30 min。
⑥ 加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），輕輕顛倒混勻，12000 rpm離心15 min。
⑦ 轉(zhuǎn)移上清液到另一新離心管中，加入0.7V異丙醇，輕輕顛倒混勻，-20℃放置30分鐘沉淀核酸。
⑧ 25℃，12000 rpm，離心10 min，收集沉淀。
⑨ 棄上清，70%乙醇洗兩次。
⑩ 涼干DNA，溶于50 μl ddH2O,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
4.DNA的提取與鑒定
你是說(shuō)DNA 的提取方法么？現(xiàn)在正在做這方面試驗(yàn)，希望能幫得上你
1） 研磨：取樣少許置入1.5ml離心管中，以移液槍加入消化緩沖液600μl，沖入液氮或少許石英砂研磨至澄清。
2） 水?。核囟?5℃，水浴時(shí)間3-5h左右
3） 酚抽提：每支離心管中加入600μl Tris飽和酚，輕柔的搖晃使固液混合充分。離心機(jī)4℃，8000r/min離心10min，以移液槍小心的將上清液取出至新管，重復(fù)步驟一次
4) Cl抽提：向抽提出的上清液中加入等體積的Cl液，輕柔的搖晃使充分混勻，高速冷凍離心機(jī)4℃，10000r/min離心10min，以液槍小心的將上清液取出。
5) DNA沉淀：向抽提的上清液中加入2倍體積的無(wú)水乙醇，并輕柔的搖晃使溶液充分，再置于-20℃冰箱中保存10min后高速冷凍離心機(jī)4℃，12000r/min離心5min，小心傾去乙醇，可見DNA沉淀物。
6) DNA 洗滌：向在留有DNA沉淀物的離心管中加入-20℃冰箱中保存的70%乙醇500μl，后離心機(jī)4℃，12000r/min離心5min，小心傾去乙醇后可見離心管底白色小圓片狀的DNA提取物。將離心管倒置于無(wú)菌室內(nèi)室溫至干燥。
7) DNA溶解：向干燥好的DNA提取物中加入30μl去離子水，4℃冰箱保存
5.DNA提取的方法有幾種分別是什么,哪種是現(xiàn)在最常用的
關(guān)于DNA的提取方法在《分子克隆》一書中有詳細(xì)介紹，其中最常用的質(zhì)粒提取方法包括： SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA煮沸裂解法制備質(zhì)粒DNA牙簽法小量制備質(zhì)粒DNASDS裂解法提取質(zhì)粒DNA 這其中SDS堿裂解法又是最常使用的提取方法。
當(dāng)然針對(duì)不同組織樣品DNA的提取方法是不同的，具體還是要參考《分子克隆》等工具書。 另外，針對(duì)不同組織的DNA樣品，就是都有很多成熟的試劑盒可以使用。
如果不是大批量使用或者經(jīng)費(fèi)充足的話，可以考慮購(gòu)買試劑盒，一般可以提取到更高質(zhì)量的DNA，并且也可以節(jié)約不少自己摸索的時(shí)間。
6.DNA的提取方法有多少種
DNA的提取方法有7種：酚抽提法、沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制備、堿變性快速制備。
DNA的提取原則 1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性； 2、核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子； 3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到最低程度； 4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。 擴(kuò)展資料提取DNA的注意事項(xiàng) 1、各操作步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。
2、注意防止非核酸類成分干擾。 3、要減少DNA的降解，促進(jìn)DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA過(guò)程中所用到的試劑和器材要通過(guò)高壓烤干等辦法進(jìn)行無(wú)核酸酶化處理。 5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
參考資料來(lái)源：百度百科-dna提取。
7.DNA鑒定方法有幾種
標(biāo)準(zhǔn)檢體︰
1. 口腔黏膜【以本中心提供之口腔棉棒采檢，棉棒須干燥保存。】
2. 血液【以紫頭EDTA采血管采集2-3ML，室溫保存寄送即可。 】
特殊檢體︰
1. 血漬【止血棉球，包過(guò)傷口的繃帶，沾血的紗布或衛(wèi)生紙，請(qǐng)裝入全新紙袋中?！?/p>
2. 耳用棉花棒【棉花棒，請(qǐng)裝入全新紙袋中?！?/p>
3. 手或腳指甲【必需剪下接近皮膚部份，請(qǐng)裝入全新紙袋中。】
4. 梳子【必需為同一人使用之梳子，請(qǐng)裝入全新紙袋中?！?/p>
5. 精液【保險(xiǎn)套，內(nèi)衣，衣服，等等……（1）液體精液： 將精液樣本沾到干凈的樣本收集器上（棉花棒，由本中心提供）.等它干約一個(gè)小時(shí)左右. （2）干的精液：先將樣本收集器沾蒸餾水用濕，再將沾精液沾到樣本收集器上.同樣等它干約一個(gè)小時(shí)左右，請(qǐng)裝入全新紙袋中。】
6. 牙齒【臼齒，前臼齒，或犬齒 （嬰兒齒無(wú)法使用），請(qǐng)裝入全新紙袋中。】
7. 牙刷【晾干牙刷約30-60分鐘，請(qǐng)放入密封保鮮袋中（全新袋子）。】
8. 牙簽【請(qǐng)使用時(shí)不要用手觸碰到，請(qǐng)裝入全新紙袋中?！?/p>
9. 使用過(guò)的手帕【鼻涕，請(qǐng)裝入全新紙袋中?！?/p>
10. 使用過(guò)的衛(wèi)生紙【鼻涕，請(qǐng)裝入全新紙袋中?！?/p>
11. 絨毛【10mg請(qǐng)?zhí)峁┠赣H檢體供比對(duì)之用?！?/p>
12. 羊水【10ml請(qǐng)?zhí)峁┠赣H檢體供比對(duì)之用。】
13. 組織【5mm冷凍或冷藏保存，或置于PBS buffer中冷藏保存。】
14. 臍帶血【1ml請(qǐng)取得母親血液供比對(duì)之用?！?/p>
15. 頭發(fā)【6-10根，需有發(fā)根（毛囊）?！?/p>
