氣相色譜柱使用(氣象色譜的使用及各種注意事項)
1.氣象色譜的使用及各種注意事項
安裝色譜柱： 1.安裝拆卸色譜柱必須在常溫下。
2.填充柱有卡套密封和墊片密封，卡套分三種，金屬卡套，塑料卡套，石墨卡套，安裝時不易擰的太緊。墊片式密封每次按裝色譜柱都要換新的墊片（島津色譜是墊片密封）。
3.色譜柱兩頭是否用玻璃棉塞好。防止玻璃棉和填料被載氣吹到檢測器中。
4.毛細(xì)管色譜柱安裝插入的長度要根據(jù)儀器的說明書而定，不同的色譜汽化室結(jié)構(gòu)不同，所以插進(jìn)的長度也不同。需要說明的如果你用毛細(xì)管色譜柱采用不分流，汽化室采用填充柱接口這時與汽化室連接毛細(xì)管柱不能探進(jìn)太多，略超出卡套即可。
氫氣和空氣的比例對FID檢測器的影響氫氣和空氣的比例應(yīng)1:10，當(dāng)氫氣比例過大時FID檢測器的靈敏度急劇下降，在使用色譜時別的條件不變的情況下，靈敏度下降要檢查一下氫氣和空氣流速。氫氣和空氣有一種氣體不足點火時發(fā)出“砰”的一聲，隨后就滅火，一般當(dāng)你點火電著就滅，再點還著隨后又滅是氫氣量不足。
使用TCD檢測器： 1.氫氣做載氣時尾氣一定要排到室外。 2.氮氣做載氣橋流不能設(shè)大，比用氫氣時要小的多。
3.沒通載氣不能給橋流，橋流要在儀器溫度穩(wěn)定后開始做樣前在給。如何判斷FID檢測器是否點著火不同的儀器判斷方法不同，有基流顯示的看基流大小，沒有基流顯示的用帶拋光面的扳手湊近檢測器出口，觀察其表面有無水汽凝結(jié)。
如何判斷進(jìn)樣口密封墊是否該換進(jìn)樣時感覺特別容易，用TCD檢測器不進(jìn)樣時記錄儀上有規(guī)則小峰出現(xiàn)，說明密封墊漏氣該更換。更換密封墊不要擰的太緊，一般更換時都是在常溫，溫度升高后會更緊，密封墊擰的太緊會造成進(jìn)樣困難，常常會把注射器針頭弄彎。
如何選擇合適的密封墊密封墊分一般密封墊和耐高溫密封墊，汽化室溫度超過300℃時用耐高溫密封墊，耐高溫密封墊的一面有一層膜，使用時帶膜的面朝下。怎樣防止進(jìn)樣針不彎很多做色譜分析工作的新手常常會把注射器的針頭和注射器桿弄彎，原因是： 1.進(jìn)樣口擰的太緊，室溫下擰的太緊當(dāng)汽化室溫度升高時硅膠密封墊膨脹后會更緊，這時注射器很難扎進(jìn)去。
2.位置找不好針扎在進(jìn)樣口金屬部位。 3.注射器桿彎是進(jìn)樣時用力太猛，進(jìn)口色譜帶一個進(jìn)樣器架，用進(jìn)樣器架進(jìn)樣就不會把注射器桿弄彎。
4.因為注射器內(nèi)壁有污染，注射時將針桿推彎。注射器用一段時間就會發(fā)現(xiàn)針管內(nèi)靠近頂部有一小段黑的東西，這時吸樣注射感到吃力。
清洗方法將針桿拔出，注入一點水，將針桿插到有污染的位置反復(fù)推拉，一次不行再注入水直到將污染物弄掉，這時你會看到注射器內(nèi)的水變的渾濁，將針桿拔出用濾紙擦一下，再用酒精洗幾次。分析的樣品為溶劑溶解的固體樣時，進(jìn)完樣要及時用溶劑洗注射器。
5.進(jìn)樣時一定要穩(wěn)重，急于求快會把注射器弄彎的，只要你進(jìn)樣熟練了自然就快了。提高分離度的幾種方法： 1.增加柱長可以增加分離度. 2.減少進(jìn)樣量（固體樣品加大溶劑量）. 3. 提高進(jìn)樣技術(shù)防止造成兩次進(jìn)樣. 4.降低載氣流速. 5.降低色譜柱溫度. 6.提高汽化室溫度. 7.減少系統(tǒng)的死體積，主要是色譜柱連接要插到位，不分流進(jìn)樣要選擇不分流結(jié)構(gòu)汽化室。
8.毛細(xì)管色譜柱要分流，選擇合適的分流比.綜上所訴要根據(jù)具體情況在實驗中摸索，比如降低載氣流速、降低色譜柱溫度又會使色譜峰變寬，因此要看色譜峰型來改變條件。最終目的是達(dá)到分離好，出峰時間快。
氣相色譜分析是在氣相色譜儀上進(jìn)行的分析，所以分析譜圖的不正常不僅反映人為的原因，更多是儀器上的原因。現(xiàn)代氣相色譜儀都有不同的故障自我診斷功能，可以給出儀器故障的原因，給分析人員極大的方便，但更多的是需要人們?nèi)ヅ袛唷?/p>
為了少出故障和盡快排除故障，人們必須遵循色譜儀安裝調(diào)試的要求，并定時進(jìn)時檢定]盡量減少操作失誤和儀器故障對分析的干擾。 為了能安全使用和獲得正確的實驗結(jié)果，本文介紹氣相色譜儀在使用中的注意事項及故障的排除以供參考。
氣相色譜儀的安裝要求氣相色譜儀在安裝時對環(huán)境有一定的要求，具體如下： 1）環(huán)境環(huán)境溫度應(yīng)在+5~+350C相對濕度<85%。 2）室內(nèi)應(yīng)無腐蝕性氣體，離儀器及氣瓶3m以內(nèi)不得有電爐和火種。
3）室內(nèi)不應(yīng)有足以影響放大器和記錄儀（或色譜工作站）正常工作的強磁場和放射源。 4）電網(wǎng)電源應(yīng)為220V（進(jìn)口儀器必須根據(jù)說明書的要求提供合適的電壓），電源電壓的變化應(yīng)在5%~10%范圍內(nèi)，電網(wǎng)電壓的瞬間波動不得超過5V。
電頻率的變化不得超過50Hz的1%（進(jìn)口儀器必須根據(jù)說明書的要求提供合適的電頻率）。采用穩(wěn)壓器時，其功率必須大于使用功率的1.5倍。
5）儀器應(yīng)平放在穩(wěn)定可靠的工作臺上，周圍不得有強震動源及放射源，工作臺應(yīng)有1m以上的空間位置。 6）有的氣相色譜儀要求有良好的接地，接地電阻必須滿足說明書的要求（美國規(guī)定綠色是地線，黑色是火線，白色是零線；英國規(guī)定綠/黃色是地線，褐色是火線，藍(lán)色是零線）。
7）氣源采用氣瓶時，氣瓶不宜放在室內(nèi)，放室外必須防太陽直射和雨淋。 氣相色譜儀故障和操作失誤的排除氣相色譜儀由六大單元組成，任一單元出現(xiàn)問題最終都會反映到色譜圖上。
現(xiàn)代的氣相色譜儀很多都具備故障診斷功能，不同程度地給出儀。
2.氣相色譜柱裝柱過程中應(yīng)注意哪些問題
1.安裝拆卸色譜柱必須在常溫下。
2.填充柱有卡套密封和墊片密封，卡套分三種，金屬卡套，塑料卡套，石墨卡套，安 裝時不易擰的太緊。墊片式密封每次按裝色譜柱都要換新的墊片（島津色譜是墊片密封）。
3.色譜柱兩頭是否用玻璃棉塞好。防止玻璃棉和填料被載氣吹到檢測器中。
4.毛細(xì)管色譜柱安裝插入的長度要根據(jù)儀器的說明書而定，不同的色譜汽化室結(jié)構(gòu)不同，所以插進(jìn)的長度也不同。需要說明的如果你用毛細(xì)管色譜柱采用不分流， 汽化室采用填充柱接口這時與汽化室連接毛細(xì)管柱不能探進(jìn)太多，略超出卡套即可。
氫氣和空氣的比例對FID檢測器的影響 氫氣和空氣的比例應(yīng)1:10，當(dāng)氫氣比例過大時FID檢測器的靈敏度急劇下降，在使用色譜時別的條件不變的情況下，靈敏度下降要檢查一下氫氣和空氣流速。 氫氣和空氣有一種氣體不足點火時發(fā)出“砰”的一聲，隨后就滅火，一般當(dāng)你點火電著就滅，再點還著隨后又滅是氫氣量不足。
3.更換色譜柱時要注意什么事項
色譜柱 的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。 ① 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。 ② 應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
③ 一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
④ 選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。 有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
⑤ 避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。 保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。
保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。 ⑥ 經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。
在進(jìn)行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。 下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。
甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。
如果下一步分析用的流動相不含緩沖液，那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇（乙腈）沖洗時重復(fù)注射100~200μl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強疏水性雜質(zhì)。
四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次。
此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0。1%）梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機物）、甲醇、水依次沖洗。 ⑦ 保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。
絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。 ⑧ 色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
在后兩種情況發(fā)生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相（與柱內(nèi)相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。
這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平。 柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護(hù)、延長柱壽命的作用。
采用保護(hù)柱會損失一定的柱效，這是值得的。 通常色譜柱壽命在正確使用時可達(dá)2年以上。
以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。 柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀?/p>
新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補加填料使柱效恢復(fù)。 每次工作完后，最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。
當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。
裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4~5天開機沖洗15分鐘。
4.氣相色譜儀的使用步驟
1打開穩(wěn)壓電源； 2打開氮氣閥，打開凈化器上的載氣開關(guān)閥，然后檢查是否漏氣，保證氣密性良好； 3調(diào)節(jié)總流量為適當(dāng)值（根據(jù)刻度的流量表測得）； 4調(diào)節(jié)分流閥使分流流量為實驗所需的流量（用皂膜流量計在氣路系統(tǒng)面板上實際測量），柱流量即為總流量減去分流量； 5打開空氣、氫氣開關(guān)閥，調(diào)節(jié)空氣、氫氣流量為適當(dāng)值； 6根據(jù)實驗需要設(shè)置柱溫、進(jìn)樣口溫度和FID檢測器溫度； 7打開計算機與工作站； 8FID檢測器溫度達(dá)到150oC以上，按FIRE鍵點燃FID檢測器火焰； 9設(shè)置FID檢測器靈敏度和輸出信號衰減； 10待所設(shè)參數(shù)達(dá)到設(shè)置時，即可進(jìn)樣分析； 11實驗完畢后，先關(guān)閉氫氣與空氣，用氮氣將色譜柱吹凈后關(guān)機。
注意事項 （必須經(jīng)嚴(yán)格的培訓(xùn)和考核合格后方可使用該儀器，未經(jīng)允許不得使用） 1氫氣發(fā)生器液位不得過高或過低； 2空氣源每次使用后必須進(jìn)行放水操作； 3進(jìn)樣操作要迅速，每次操作要保持一致； 4使用完畢后須在記錄本上記錄使用情況。
5.柱色譜中加混合樣品時應(yīng)該注意哪些操作
柱色譜的使用注意事項很多，作為精密測試儀器，我們要盡可能多的考慮能夠引起各種誤差的操作。不僅僅是加注樣品時候哦。
1. 色譜柱使用前注意事項：
色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱，輕則沒有數(shù)據(jù)，重則報廢。嚇人不嚇人你說。
2. 流動相：
在進(jìn)行樣品檢測前，至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應(yīng)當(dāng)天配制以保持新鮮避免細(xì)菌產(chǎn)生，當(dāng)然一般情況下都是隨用隨配的，沒人懶到一下配好幾天用的。
流動相使用前需用微孔濾膜過濾，消除流動相中顆粒對色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動相混合后應(yīng)重新過濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應(yīng)使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5%的有機溶劑沖洗色譜柱，同時可以達(dá)到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。
流動相需脫氣后使用，可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與色譜柱保存使用的流動相有較大區(qū)別，應(yīng)該使用過度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結(jié)晶造成對色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。
流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0,BDSC18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當(dāng)必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來所使用的流動相。
流動相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。一旦造成這種情況，很難恢復(fù)。
色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。避免壓力突然上升或變化幅度過大，否則會造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。操作溫度不要超過60℃哦，
3. 樣品：
樣品應(yīng)當(dāng)盡可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。
樣品溶液在進(jìn)樣前應(yīng)使用針頭式過濾器對樣品預(yù)先過濾。頻繁改變流動相組成，會加速降低柱效。
樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱（SPE）對樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
ps：題主認(rèn)為以上啰嗦的太多么？要知道這么精密的儀器，用起來的啰嗦事更多，否則也對不起那么精準(zhǔn)的數(shù)據(jù)不是？科學(xué)要嚴(yán)謹(jǐn)，操作多謹(jǐn)慎。
