熱原檢測方法(熱原檢查法有什么和什么)
1.熱原檢查法有什么和什么
熱原檢查法有家兔法和鱟試劑法
熱原檢查（家兔法）
由于家兔對熱原的反應(yīng)與人基本相似，家兔法為各國藥典規(guī)定的檢查熱原的法定方法。
《中國藥典》2005年版規(guī)定的熱原檢查法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。
檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性取決于試驗(yàn)動(dòng)物的狀況、試驗(yàn)室條件和操作的規(guī)范性。家兔法檢測內(nèi)毒素的靈敏度為0.001μg/ml，試驗(yàn)結(jié)果接近人體真實(shí)情況，但操作繁瑣費(fèi)時(shí)，不能用于注射劑生產(chǎn)過程中的質(zhì)量監(jiān)控，且不適用于放射性藥物、腫瘤抑制劑等細(xì)胞毒性藥物制劑。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（鱟試劑法）
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法.細(xì)菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU）表示。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查包括凝膠法和光度測定法兩種方法，前者利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來檢測或半定量內(nèi)毒素，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法，系分別利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化及產(chǎn)生的凝固酶使特定底物釋放出呈色團(tuán)的多少來測定內(nèi)毒素。
鱟試劑法檢查內(nèi)毒素的靈敏度為0.0001μg/ml，比家兔法靈敏10倍，操作簡單易行，試驗(yàn)費(fèi)用低，結(jié)果迅速可靠，適用于注射劑生產(chǎn)過程中的熱原控制和家兔法不能檢測的某些細(xì)胞毒性藥物制劑，但其對革蘭陰性菌以外的內(nèi)毒素不靈敏，鱟試劑法尚不能完全代替家兔法。
2.簡述除去熱原的方法有哪些
熱原（pyrogen）系指能引起恒溫動(dòng)物體溫異常升高的致熱物質(zhì)。
它包括細(xì)菌性熱原、內(nèi)源性高分子熱原、內(nèi)源性低分子熱原及化學(xué)熱原等。這里所指的“熱原”，主要是指細(xì)菌性熱原，是某些細(xì)菌的代謝產(chǎn)物、細(xì)菌尸體及內(nèi)毒素。
致熱能力最強(qiáng)的是革蘭氏陰性桿菌的產(chǎn)物，其次是革蘭陽性桿菌類，革蘭陽性球菌則較弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能產(chǎn)生熱原。 發(fā)熱機(jī)理 熱原——白細(xì)胞（WBC）——吞噬——白細(xì)胞崩解，釋放內(nèi)源性致熱原——作用于體溫調(diào)節(jié)中樞——產(chǎn)熱增加、散熱減少——體溫上升。
檢查方法 熱原檢查（家兔法） 由于家兔對熱原的反應(yīng)與人基本相似，家兔法為各國藥典規(guī)定的檢查熱原的法定方法。 《中國藥典》2005年版規(guī)定的熱原檢查法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。
檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性取決于試驗(yàn)動(dòng)物的狀況、試驗(yàn)室條件和操作的規(guī)范性。家兔法檢測內(nèi)毒素的靈敏度為0.001μg/ml，試驗(yàn)結(jié)果接近人體真實(shí)情況，但操作繁瑣費(fèi)時(shí)，不能用于注射劑生產(chǎn)過程中的質(zhì)量監(jiān)控，且不適用于放射性藥物、腫瘤抑制劑等細(xì)胞毒性藥物制劑。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（鱟試劑法） 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法.細(xì)菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU）表示。 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查包括凝膠法和光度測定法兩種方法，前者利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來檢測或半定量內(nèi)毒素，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法，系分別利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化及產(chǎn)生的凝固酶使特定底物釋放出呈色團(tuán)的多少來測定內(nèi)毒素。
鱟試劑法檢查內(nèi)毒素的靈敏度為0.0001μg/ml，比家兔法靈敏10倍，操作簡單易行，試驗(yàn)費(fèi)用低，結(jié)果迅速可靠，適用于注射劑生產(chǎn)過程中的熱原控制和家兔法不能檢測的某些細(xì)胞毒性藥物制劑，但其對革蘭陰性菌以外的內(nèi)毒素不靈敏，鱟試劑法尚不能完全代替家兔法。 熱原除去方法 （一）除去藥液中熱原的方法 1、活性炭吸附法：即在配液時(shí)加入0.1-0.5%（溶液體積）的針用一級活性炭，煮沸并攪拌15分鐘，即能除去大部分熱原，而且活性炭還有脫色、助濾、除臭作用。
但活性炭也會(huì)吸附部分藥液，故使用時(shí)應(yīng)過量投料，但小劑量藥物不宜使用。 2、離子交換法：熱原在水溶液中帶負(fù)電，可被陰樹脂所交換，但樹脂易飽和，須經(jīng)常再生。
3、凝膠過濾法：凝膠為一分子篩，利用熱原與藥物分子量的差異，將兩者分開。但當(dāng)兩者分子量相差不大時(shí)，不宜使用。
4、超濾法：超濾膜的膜孔僅為3.0-15nm，故可有效去除藥液中的細(xì)菌與熱原。 （二）除去器具上熱原的方法 1、酸堿法：因熱原能被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或強(qiáng)氧化劑等破壞，所以玻璃容器、用具及輸液瓶等均可使用重鉻酸鉀硫酸清潔液浸泡以破壞熱原。
2、高溫法：注射用針頭、針筒及玻璃器皿等，先洗滌潔凈烘干后，再在180℃加熱2小時(shí)或250℃加熱30分鐘以上處理破壞熱原。 （三）除去溶媒中熱原的方法 1、蒸餾法：利用熱原的不揮發(fā)性來制備注射用水，但熱原又具有水溶性，所以蒸餾器要有隔沫裝置，擋住霧滴的通過，避免熱原進(jìn)入蒸餾水中。
2、反滲透法：用醋酸纖維素膜和聚酰胺膜制備注射用水可除去熱原，與蒸餾法相比，具有節(jié)約熱能和冷卻水的優(yōu)點(diǎn)。
3.什么是熱原檢查法
本法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。
供試用家兔 供試用的家兔應(yīng)健康無傷，體重1。7~3。
0kg，雌兔應(yīng)無孕。預(yù)測體溫前7日即應(yīng)用同一飼料飼養(yǎng)，在此期間內(nèi)，體重應(yīng)不減輕，精神、食欲、排泄等不得有異?，F(xiàn)象。
未經(jīng)使用于熱原檢查的家兔；或供試品判定為符合規(guī)定，但組內(nèi)升溫達(dá)0。6℃的家兔；或供試品判定為不符合規(guī)定，但其組內(nèi)家兔平均升溫未達(dá) 0。
8℃，且已休息兩周以上的家兔；或三周內(nèi)未曾使用的家兔，均應(yīng)在檢查供試品前3~7日內(nèi)預(yù)測體溫，進(jìn)行挑選。挑選試驗(yàn)的條件與檢查供試品時(shí)相同，僅不注射藥液，每隔1小時(shí)測量體溫1次，共測4次，4次體溫均在38。
0~39。6℃的范圍內(nèi)，且最高最低體溫的差數(shù)不超過0。
4℃的家兔，方可供熱原檢查用。用于熱原檢查后的家兔，如供試品判定為符合規(guī)定，至少應(yīng)休息2日方可供第2次檢查用。
如供試品判定為不符合規(guī)定，且其組內(nèi)家兔平均升溫達(dá)0。8℃或更高時(shí)，則組內(nèi)全部家兔不再使用。
每一家兔的使用次數(shù)，用于一般藥品的檢查，不應(yīng)超過10次。 試驗(yàn)前的準(zhǔn)備 在作熱原檢查前1~2 日，供試用家兔應(yīng)盡可能處于同一溫度的環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室的溫度相差不得大于5℃，實(shí)驗(yàn)室的溫度應(yīng)在17~28℃，在試驗(yàn)全部過程中，應(yīng)注意室溫變化不得大于3℃，應(yīng)避免噪音干擾。
家兔在試驗(yàn)前至少1小時(shí)開始停止給食并置于適宜的裝置中，直至試驗(yàn)完畢。家兔體溫應(yīng)使用精密度為±0。
1℃的肛溫計(jì)，或其他同樣精確的測溫裝置。肛溫計(jì)插入肛門的深度和時(shí)間各兔應(yīng)相同，深度一般約6cm，時(shí)間不得少于1分半鐘，每隔30~60分鐘測量體溫1次，一般測量2 次，兩次體溫之差不得超過0。
2℃，以此兩次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。當(dāng)日使用的家兔，正常體溫應(yīng)在38。
0~39。6℃的范圍內(nèi)，且各兔間正常體溫之差不得超過1℃。
試驗(yàn)用的注射器、針頭及一切和供試品溶液接觸的器皿，應(yīng)置烘箱中用250℃加熱30分鐘或用180℃加熱2小時(shí)，也可用其他適宜的方法除去熱原。 檢查法 取適用的家兔3只，測定其正常體溫后15分鐘以內(nèi)，自耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s38℃的供試品溶液，然后每隔1小時(shí)按前法測量其體溫1次，共測 3次，以3次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高度數(shù)。
如3只家兔中有1只體溫升高0。 6℃或0。
6℃以上，或3只家兔體溫升高均低于 0。6℃，但升高的總數(shù)達(dá)1。
4℃或1。4℃以上，應(yīng)另取5只家兔復(fù)試，檢查方法同上。
結(jié)果判斷 在初試3只家兔中，體溫升高均低于0。6℃，并且3只家兔體溫升高總數(shù)低于1。
4℃；或在復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0。 6℃或0。
6℃以上的兔數(shù)僅有1只，并且初試、復(fù)試合并8只家兔的體溫升高總數(shù)為3。5℃或3。
5℃以下，均認(rèn)為供試品的熱原檢查符合規(guī)定。 在初試3只家兔中，體溫升高0。
6℃或0。6℃以上的兔數(shù)超過1只；或在復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0。
6℃或0。 6℃以上的兔數(shù)超過1只；或在初試、復(fù)試合并8只家兔的體溫升高總數(shù)超過3。
5℃，均認(rèn)為供試品的熱原檢查不符合規(guī)定。 以上是我對于這個(gè)問題的解答，希望能夠幫到大家。
