細菌特殊染色方法(細菌染色方法)
1.細菌有哪些染色方法
一、常用的染色方法有革蘭氏染色（最基本）、芽孢染色、莢膜染色、鞭毛染色等。
二、.1 革蘭染色法 （1）取含金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的混合菌液涂片、干燥、固定；（2）染色：用結晶紫染液染1min，水沖洗；盧戈碘液染1min，水沖洗；0.4%復紅酒精溶液染30s，水沖洗；（3）吸干后鏡檢[2] 。
1.2 抗酸染色法 （1）取結核桿菌陽(yáng)性的痰標本（已處理）涂片、干燥、固定。（2）染色：將石炭酸復紅染液沸水浴10min，滴加2~3滴覆蓋菌膜染色 5min，水沖洗，3%鹽酸酒精脫色30s，水沖洗；堿性美蘭復染30s，水沖洗。（3）吸干后鏡檢[3] 。
1.3 莢膜染色法 （1）取接種肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液涂片、干燥、固定；（2）染色：用石炭酸復紅染液染1min，水沖洗；95%酒精脫色5s水沖洗；20%鞣酸溶液媒染10min水沖洗；0.8%孔雀綠溶液染色1min，水沖洗；（3）吸干后鏡檢[4] 。
1.4 芽胞染色法 （1）取等量破傷風(fēng)桿菌厭氧培養菌液和5%孔雀綠水溶液，放入小試管中充分混合，沸水浴20min；取上述混合液涂片、干燥、固定；（2）用 1%沙黃液復染10min，水沖洗；（3）干后鏡檢。
2.1 革蘭染色 鏡下，金黃色葡萄球菌染成紫色、球形，為革蘭陽(yáng)性菌；大腸埃希菌染成紅色、桿狀，為革蘭陰性菌。革蘭染色法是細菌學(xué)中最經(jīng)典，應用最廣泛的染色法之一。脫色是影響革蘭染色的關(guān)鍵步驟，脫色時(shí)間長(cháng)短直接關(guān)系到染色結果的準確性[5] 。脫色過(guò)度則革蘭陽(yáng)性菌可能被誤染為革蘭陰性菌，脫色不 夠則革蘭陰性菌可能被誤染為革蘭陽(yáng)性菌，為此學(xué)生難以把握。現將原有四步染色法改為三步法，即把第三步酒精脫色和第四步復紅復染合并一步進(jìn)行，使用 0.4%復紅酒精溶液作為復染劑，可達到脫色和復染雙重目的。這樣，就可以避免學(xué)生在四步法中因脫色時(shí)間不易掌握而造成染色的失敗，減少重復性實(shí)驗，提高了教學(xué)效果。
2.2 抗酸染色 鏡下，結核分枝桿菌染成紅色，為抗酸菌；背景和其他菌被染成藍色，為非抗酸菌。傳統的方法是滴加石炭酸復紅染液于涂片上，用玻片夾夾住涂片以微火煙葉熱，保持染液冒蒸汽約5min，此法學(xué)生容易使染液蒸干或使染液沸騰，從而影響染色效果和污染環(huán)境。改良后的方法是將染液直接加熱改為水浴后使用，克服上述的缺點(diǎn)，且染色效果良好。適合實(shí)驗教學(xué)使用。
2.3 莢膜染色 鏡下，肺炎球菌菌體染成紅色（成雙排列），莢膜染成綠色，存在于菌體的周?chē)鹘y的莢膜染色是用結晶紫染液染色，菌體染成紫色，莢膜染成淡紫色或無(wú)色，菌體和莢膜之間反差小，不易分辨。改良后，增加了脫色、媒染、復染的步驟，使菌體和莢膜之間反差增大，易于觀(guān)察，可用于學(xué)生實(shí)驗和示教片的制作。
2.4 芽胞染色 鏡下，破傷風(fēng)桿菌的菌體染成紅色，芽胞染成綠色。傳統的方法是滴加石炭酸復紅染液于涂片上并弱火加熱，使染液冒蒸汽約5min，此法染液用量大，且容易污染衣物和實(shí)驗臺。現改為菌液和染液混合水浴加熱初染，然后制備涂片、固定、復染，即節約時(shí)間，染液消耗又少，且菌體、芽胞對比鮮明。此法適用于教學(xué)標本片的制作。
三、簡(jiǎn)單染色法是利用單一染料對細菌進(jìn)行染色的一種方法。
操作步驟
1.涂片：用灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜。
2.干燥：可自然晾干，或將涂片置于火焰高處微熱烘干，但不能直接在火焰上烘烤。
3.固定：手執玻片一端，有菌膜的一面朝上，通過(guò)迅速通過(guò)火焰2-3次（用手指觸涂片反面，以不燙手為宜）。
4.染色：加適量（以蓋滿(mǎn)菌膜為度）結晶紫染色液（或石炭酸復紅液），染l~2min。
5.水洗：用自來(lái)沖洗至流下的水中無(wú)染色液的顏色時(shí)為止。
6.干燥
7.鏡檢
2.細菌染色方法有哪些
1 革蘭氏染色法 是最常用的鑒別染色法之一。此法起始1881年，染色步驟是先用結晶紫或龍膽紫染液加于已固定好的標本上使之著(zhù)色，其后加碘液作媒染劑，再用酒精脫色，最后用復紅或沙黃復染。革蘭氏染色的結果與培養基成分、培養條件及操作技術(shù)等有密切關(guān)系。如涂片太厚影響酒精脫色，革蘭氏陰性菌則可染成革蘭氏陽(yáng)性菌。脫色時(shí)若酒精作用時(shí)間太長(cháng)， ，莢膜不著(zhù)色，包繞在菌體周?chē)蔀橐粚油该鞯目杖Α?5 熒光染色法 用熒光染料，如金胺、吖啶橙等進(jìn)行染色。細菌用熒光染料著(zhù)色后在熒光顯微鏡下檢查，可在黑的背景中觀(guān)察到細菌發(fā)出明亮的熒光。用熒光染色法檢查細菌，有加快檢查速度和提高陽(yáng)性率等優(yōu)點(diǎn)。
3.給細菌染色的方法都有幾種,怎么操作,都用復紅染色
給細菌染色的方法都有幾種，怎么操作，都用復紅染色
簡(jiǎn)單染色法：利用單一染料對細菌進(jìn)行染色的一種方法.例如番紅.
1.涂片：用灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜.
2.干燥：可自然晾干，或將涂片置于火焰高處微熱烘干，但不能直接在火焰上烘烤.
3.固定：手執玻片一端，有菌膜的一面朝上，通過(guò)迅速通過(guò)火焰2-3次（用手指觸涂片反面，以不燙手為宜）.
4.染色：加適量（以蓋滿(mǎn)菌膜為度）結晶紫染色液（或石炭酸復紅液），染l~2min.
5.水洗：用自來(lái)沖洗至流下的水中無(wú)染色液的顏色時(shí)為止.
6.干燥
7.鏡檢
復染色：利用用兩種以上染料對細菌進(jìn)行染色.例如革蘭氏染色法.
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個(gè)步驟，需要堿性染料（basic dye）初染液；媒染劑（mordant）；脫色劑（decolorising agent）和復染液（counterstain）.
堿性染料初染液的象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣，而用于革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫（crystal violet）.媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著(zhù)力，即以某種方式幫助染料固定在細胞上，使不易脫落，碘（iodine ）是常用的媒染劑.脫色劑是將被染色的細胞進(jìn)行脫色，不同類(lèi)型的細胞脫色反應不同，有的能被脫色，有的則不能，脫色劑常用95%的酒精（ethanol）.復染液也是一種堿性染料，其顏色不同于初染液，復染的目的是使被脫色的細胞染上不同于初染液的顏色，而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色，而且將細胞區分成G+和G-兩大類(lèi)群，常用的復染液為番紅.
1.載玻片固定.在無(wú)菌操作條件下，用接種環(huán)挑取少量細菌于干凈的載玻片上涂布均勻，在火焰上加熱以殺死菌種并使其粘附固定.
2.草酸銨結晶紫染1分鐘.
3.自來(lái)水沖洗，去掉浮色.
4.用碘-碘化鉀溶液媒染1分鐘，傾去多余溶液.
5.用中性脫色劑如乙醇（95%）或丙酮酸脫色30秒，革蘭氏陽(yáng)性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無(wú)色.
6.用番紅染液或者沙黃復染30秒，革蘭氏陽(yáng)性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現紅色.
4.給細菌染色的方法都有幾種,怎么操作,都用復紅染色嗎
常用的細菌染色方法有簡(jiǎn)單染色和革蘭氏染色。1、簡(jiǎn)單染色是利用單一染料對細菌進(jìn)行染色，常用堿性染料如美藍、結晶紫、堿性復紅等。方法很簡(jiǎn)單：（一）制片：進(jìn)行無(wú)菌涂片->；自然風(fēng)干->；微火固定 （二）染色：例如用美藍染色3-5分鐘，濾紙吸干后就可以置于顯微鏡下觀(guān)察了
2、革蘭氏染色：使用非常普遍。方法：（1）用堿性染料結晶紫對菌液涂片進(jìn)行初染（2）用碘液進(jìn)行媒染（3）用乙醇沖洗以脫色（4）用一種與結晶紫不同顏色的堿性染料進(jìn)行復染如沙黃。
這些實(shí)驗都很簡(jiǎn)單，到時(shí)候你親自做一遍就會(huì )很明白了，你現在只需弄清原理和簡(jiǎn)單過(guò)程就行。
5.細菌細胞染色的方式有哪幾種,各有什么優(yōu)缺點(diǎn)
質(zhì)粒是細菌染色體外的遺傳物質(zhì)，多為環(huán)狀雙螺旋DNA分子。
質(zhì)粒可以自身復制，質(zhì)粒是自行復制單位，有的需與核質(zhì)染色體的復制同步，稱(chēng)為嚴緊型復制（stringent replication）。 質(zhì)粒編碼細菌各種重要的生物學(xué)性狀。
編碼性菌毛的質(zhì)粒稱(chēng)致育質(zhì)粒或F質(zhì)粒（fertility plasmid），具有F質(zhì)粒的細菌有性菌毛。編碼細菌各種毒力因子的質(zhì)粒統稱(chēng)毒力質(zhì)粒或Ⅵ質(zhì)粒（virulence plasmid），如致病性大腸桿菌在黏膜上定居及產(chǎn)生毒素的能力可由不同質(zhì)粒編碼，其中K質(zhì)粒編碼對黏膜具有黏附活性的菌毛，ST質(zhì)粒與LT質(zhì)粒分別編碼耐熱腸毒素和不耐熱腸毒素。
細菌對抗菌藥物或重金屬鹽類(lèi)的抗性則由R質(zhì)粒（resistance plasmid）所決定。一個(gè)質(zhì)粒可同時(shí)具有幾種編碼功能。
有的質(zhì)粒還可以結合到染色體上，如F質(zhì)粒在變形桿菌內是獨立存在的，但在大腸桿菌內則可與染色體結合，這種質(zhì)粒稱(chēng)為附加體（episome）。 轉座因子 （transposable element）近年來(lái)發(fā)現微生物的某些DNA片段作為一個(gè)獨立單位可在染色體上移動(dòng)，此種移動(dòng)甚至可發(fā)生在不同種細胞之間。
這種可移動(dòng)的DNA片段稱(chēng)之為轉座因子。細菌的轉座因子有三種類(lèi)型：插入序列（insert sequence,IS）、轉座子（transposon,Tn）以及某些特殊的噬菌體。
毒力島 （pathogen。質(zhì)粒是細菌染色體外的遺傳物質(zhì)，多為環(huán)狀雙螺旋DNA分子。
質(zhì)粒可以自身復制，質(zhì)粒是自行復制單位，有的需與核質(zhì)染色體的復制同步，稱(chēng)為嚴緊型復制（stringent replication）。 質(zhì)粒編碼細菌各種重要的生物學(xué)性狀。
編碼性菌毛的質(zhì)粒稱(chēng)致育質(zhì)粒或F質(zhì)粒（fertility plasmid），具有F質(zhì)粒的細菌有性菌毛。編碼細菌各種毒力因子的質(zhì)粒統稱(chēng)毒力質(zhì)粒或Ⅵ質(zhì)粒（virulence plasmid），如致病性大腸桿菌在黏膜上定居及產(chǎn)生毒素的能力可由不同質(zhì)粒編碼，其中K質(zhì)粒編碼對黏膜具有黏附活性的菌毛，ST質(zhì)粒與LT質(zhì)粒分別編碼耐熱腸毒素和不耐熱腸毒素。
細菌對抗菌藥物或重金屬鹽類(lèi)的抗性則由R質(zhì)粒（resistance plasmid）所決定。一個(gè)質(zhì)粒可同時(shí)具有幾種編碼功能。
有的質(zhì)粒還可以結合到染色體上，如F質(zhì)粒在變形桿菌內是獨立存在的，但在大腸桿菌內則可與染色體結合，這種質(zhì)粒稱(chēng)為附加體（episome）。 轉座因子 （transposable element）近年來(lái)發(fā)現微生物的某些DNA片段作為一個(gè)獨立單位可在染色體上移動(dòng)，此種移動(dòng)甚至可發(fā)生在不同種細胞之間。
這種可移動(dòng)的DNA片段稱(chēng)之為轉座因子。細菌的轉座因子有三種類(lèi)型：插入序列（insert sequence,IS）、轉座子（transposon,Tn）以及某些特殊的噬菌體。
毒力島 （pathogenicity island,PAl）是20世紀90年代提出的一個(gè)新概念。PAI指病原菌的某個(gè)或某些毒力基因群，分子結構與功能有別于細菌染色體，但位于細菌染色體之內，因此稱(chēng)之為‘島”。
PAI雖然是染色體的DNA片段，但兩端往往具有重復序列與插入元件，其G+C%及密碼使用與細菌染色體有明顯差異，分子量多為30~40kb，也有達100kb者。
