核酸的提取和制備通常還用哪些方法(PCR反應模板核酸的提取制備方法是什么)
1.PCR反應模板核酸的提取制備方法是什么
異硫氰酸胍提取編輯異硫氰酸胍法提取制備模板核酸此法主要用于RNA的提取.標本為組織細胞及血清等.1.異硫氰酸胍消化液異硫氰酸胍4mol/L檸檬酸鈉（PH7.0）25mmol/L十二烷基肌酸鈉0.5%β巰基乙醇0.1mol/L2.消化方法：用50~100ul細胞懸液及血清，加等體積的異硫氰酸胍消化液振混勻后，或65℃1小時(shí)，或室溫放置數分鐘，然后加1/10體積的3mmol/LpH5.2的醋酸鈉緩沖液，再加等體積的酚：氯仿，用力振搖約10s,10000r/min，離心5min，取上清加等體積異丙醇20℃放置3h后，14000r/min離心15min，沉定用75%冰冷乙醇離心洗滌1~2次，真空干燥，沉淀用TE緩沖液溶解即可用于逆轉錄PCR擴增，或放20℃保存。
2.核酸純化試劑的使用方法和注意事項有哪些
使用方法因廠(chǎng)家不同而不同，下面是一氪生物技術(shù)的核酸純化試劑使用方法及注意事項，供參考：
步驟一：使用無(wú)水乙醇與純化水配制70%乙醇備用。
步驟二：從2-8℃冰箱中取出磁珠懸浮液，在室溫條件下震蕩混勻，平衡30min。
步驟三：將充分震蕩混勻平衡后的磁珠加入待純化酶反應或PCR反應產(chǎn)物溶液中。磁珠加入體積分別參考圖1和圖2，若待純化產(chǎn)物體積不足，可用純化水或10mM Tris-HCl(pH8.0)補充至相應體積。
步驟四：用移液器反復吹打10次，將磁珠懸浮液和PCR產(chǎn)物或者酶反應物充分混勻，室溫條件下靜置5min。
步驟五：將反應板放置在磁力架上，靜置2min，待溶液澄清后將上清吸走，轉入廢液桶內。
步驟六：向反應板中加入200μL新鮮配置的70%的乙醇，室溫靜置30s。靜置結束后將乙醇吸走，轉入廢液桶內。操作環(huán)節不可將反應板從磁力分離架上拿下或將磁珠吹散。
步驟七：重復步驟六。
步驟八：保持反應板置于磁力架上狀態(tài)，室溫開(kāi)蓋晾干2min以去除殘存的乙醇。
步驟九：將反應板從磁力架上取下來(lái)，加入50μL洗脫液，移液器反復吹打10次混勻，室溫靜置3min。洗脫液加入量根據實(shí)際需要而定，但應不少于5μL。
步驟十：將反應板重新放置在磁力架上，室溫靜置1min，上清液即純化后的DNA產(chǎn)物。
步驟十一：將上清液轉入新的反應管或者反應板中，供下一步反應或檢測使用。
3.要獲取完整核酸需要采取什么措施
在dna的提取過(guò)程中防止脫氧核糖核酸酶的水解作用，應采取哪些措施
相同點(diǎn)：都能以DNA為模板，從5'向3'進(jìn)行核苷酸或脫氧核苷酸的聚合反應。
不同點(diǎn)
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP;DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶沒(méi)有，當需要解開(kāi)雙鏈的時(shí)候要解旋酶和拓撲異構酶的幫助。
4、RNA聚合酶只具有5'到3'端的聚合酶活性，而DNA聚合酶不僅有5'到3'端的聚合酶活性，還具有3'到5'端的外切酶活性。保證DNA復制時(shí)候校對，所以復制的忠實(shí)性高于轉錄的。
5、RNA聚合酶通常作用于轉錄過(guò)程；DNA聚合酶通常作用于DNA復制過(guò)程
4.提取制備RNA常用的方法有哪幾種,各有何優(yōu)缺點(diǎn)
常見(jiàn)的RNA提取方法有苯酚法、陰離子去污劑法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、異硫氫酸胍法、CTAB法、熱硼酸法及改良熱硼酸法、TRIZOL試劑快速提取法。
RNA提取時(shí)，就變性劑的選擇來(lái)說(shuō)，CTAB(CTAB法)比異硫氰酸胍（RIZOL試劑法）和 SDS（改良熱硼酸法）更有效；就CTAB法來(lái)說(shuō)，由于以CTAB為變性劑，同時(shí)加入PVP和β一巰基乙醇共同作用變性蛋白、抑制RNase的活性，使用無(wú)水乙醇或異丙醇沉淀雜蛋白和總核酸等，然后再選擇性地分離出RNA。
5.DNA的提取方法有多少種
DNA的提取方法有7種：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒纏繞法、異丙醇bai沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制du備、堿變性快速制備。
DNA的提取原則
1、保證核酸一級結構的完整性；
2、核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子；
3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類(lèi)分子的污染應zhi降低到最低程度；
4、其他核酸分子，如RNA，也應盡量去除。
擴展資料
提取daoDNA的注意事項
1、各操作內步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。
2、注意防止非核酸類(lèi)成分干擾。
3、要減少DNA的降解，促進(jìn)DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA過(guò)程中所用到的試劑和器材容要通過(guò)高壓烤干等辦法進(jìn)行無(wú)核酸酶化處理。
5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
參考資料來(lái)源：百度百科-dna提取
6.在核酸的分離提取和純化過(guò)程中,都利用核酸的哪些生物學(xué)特性
核酸（nucleic acid）是遺傳信息的攜帶者，是基因表達的物質(zhì)基礎。無(wú)論是進(jìn)行核酸結構還是功能研究，首先需要對核酸進(jìn)行分離和純化。核酸樣品質(zhì)量將直接關(guān)系到實(shí)驗的成敗。核酸分離、純化原則：1.保持核酸分子一級結構的完整性。因為遺傳信息全部?jì)Υ嬖谝患壗Y構之中，核酸的—級結構還決定其高級結構的形式以及和其他生物大分子結合的方式。2.分離核酸原則：1）溫度不要過(guò)高；2）控制pH值范圍（pH值5-9）; 3）保持一定離子強度； 4）減少物理因素對核酸的機械剪切力.
在核酸分離提取中最重要的是要防止核酸的生物降解，細胞內或外來(lái)的各種核酸酶能消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵，破壞核酸一級結構。所用器械和一些試劑需高溫滅菌，提取緩沖液中需加核酸酶抑制劑。
常用的DNA酶抑制劑有1.金屬離子螯合劑：如EDTA-Na2（乙二胺四乙酸二鈉）、8-羥基喹啉。2.陰離于型表面活性劑如SDS，該試劑除對核酸酶有抑制作用外，還能使蛋白質(zhì)變性，并與變性蛋白結合成帶負電荷的復合物，該復合物在高鹽溶液中沉淀。
常用的RNA酶（RNAase）抑制劑有：1.皂土（bentonite ）作用機制：皂土帶負電荷，能吸附RNase，使其失活。2. DEPC（二乙基焦碳酸鹽） （C2H5OCOOCOOC2H5）粘性液體，很強的核酸酶抑制劑。作用機制：與蛋白質(zhì)中His結合使蛋白變性。
以上答案希望對你有幫助。
7.DNA的提取方法有多少種
DNA的提取方法有7種：酚抽提法、沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制備、堿變性快速制備。
DNA的提取原則 1、保證核酸一級結構的完整性； 2、核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子； 3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類(lèi)分子的污染應降低到最低程度； 4、其他核酸分子，如RNA，也應盡量去除。 擴展資料提取DNA的注意事項 1、各操作步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。
2、注意防止非核酸類(lèi)成分干擾。 3、要減少DNA的降解，促進(jìn)DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA過(guò)程中所用到的試劑和器材要通過(guò)高壓烤干等辦法進(jìn)行無(wú)核酸酶化處理。 5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
參考資料來(lái)源：百度百科-dna提取。
8.提取DNA的方法有哪些
DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來(lái).
也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時(shí)，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離.在提取過(guò)程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱(chēng)SSC溶液，提取DNA.
(2).陰離子去污劑法：
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結合，因為陰離子去污劑能夠破壞這種價(jià)鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA.
(3).苯酚抽提法：
苯酚作為蛋白變性劑，同時(shí)抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí)，由于蛋白與DNA 聯(lián)結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.離心分層后取出水層，多次重復操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA .此時(shí)DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團，取出.此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .
( 4).水抽提法：
利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過(guò)程中加入SDS.
