簡(jiǎn)述無(wú)菌技術(shù)注意事項(xiàng)
1.無(wú)菌操作時(shí)注意事項(xiàng)
體外培養(yǎng)細(xì)胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是決定培養(yǎng)成功或失敗的首要條件。即便使用設(shè)備完善的實(shí)驗(yàn)室。若實(shí)驗(yàn)者粗心大意，技術(shù)操作不規(guī)范，也會(huì)導(dǎo)致污染。因而.為在一切操作中為最大可能的保證無(wú)菌.每一項(xiàng)工作都必須做到有條不紊和完全靠。
【培養(yǎng)前準(zhǔn)備】在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備各種所需器材和物品、清點(diǎn)無(wú)誤后將其放置操作場(chǎng)所（培養(yǎng)室、超凈臺(tái)）內(nèi)，然后開(kāi)始消毒。這可以避免開(kāi)始實(shí)驗(yàn)后.囚物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會(huì)。
【操作野消毒】無(wú)菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次（拖布要專(zhuān)用）.紫外線照射消毒30-50min，超凈工作臺(tái)臺(tái)面每次實(shí)驗(yàn)前要用75%酒精擦洗。然后紫外線淌毒30min。在工作臺(tái)面消毒時(shí)切勿將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)用液同時(shí)照射紫外線，消毒時(shí)工作臺(tái)面上用品不要過(guò)多或重疊放置.否則會(huì)遮擋射線降低消毒效果。—些操作用具如移液器、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺(tái)內(nèi)同時(shí)紫外線消毒。
【洗手和著裝】原則上和外科手術(shù)相同。平時(shí)僅做觀察不做培養(yǎng)操作時(shí)，可穿裝細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)紫外線照射30min的清潔工作服。在利用超凈臺(tái)工作時(shí)，因整個(gè)前臂要伸入箱內(nèi)，應(yīng)著長(zhǎng)袖的清潔工作服，并于開(kāi)始操作前要用75%酒精消毒手。如果實(shí)驗(yàn)過(guò)程中手觸及可能污染的物品和出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手。進(jìn)入原代培養(yǎng)室需徹底洗手還要戴口罩、著消毒衣帽。
【火焰消毒】 在無(wú)菌環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)或做其它無(wú)菌工作時(shí)，首先要點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈。以后一切操作，如按裝吸管帽、打開(kāi)或封閉瓶口等，都需在火焰近處并經(jīng)過(guò)燒灼進(jìn)行。但要注意：金屬器械不能在為焰中燒的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以防退火，燒過(guò)的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。吸取過(guò)營(yíng)養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營(yíng)養(yǎng)液能燒焦形成炭膜，再用時(shí)會(huì)把有害物帶入營(yíng)養(yǎng)液中。開(kāi)啟、關(guān)閉長(zhǎng)有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時(shí)，火焰滅菌時(shí)間要短。防止因溫度過(guò)高燒死細(xì)胞。另外膠塞過(guò)火焰時(shí)也不能時(shí)間長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞。
【操作】 進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機(jī)會(huì)。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。為拿取方便，工作臺(tái)面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細(xì)胞在未做處理之前，勿過(guò)早暴露在空氣中。同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過(guò)早開(kāi)瓶；用過(guò)之后如不再重復(fù)使用，應(yīng)立即封閉瓶口直立可增加落菌機(jī)會(huì)。吸取營(yíng)養(yǎng)液、PBS、細(xì)胞懸液及其它各種用液時(shí)，均應(yīng)分別使用吸管，不能混用，以防擴(kuò)大污染或?qū)е录?xì)胞交叉污染。工作中不能面向操作野講話或咳嗽，以免唾沫把細(xì)菌或支原體帶入工作臺(tái)面發(fā)生污染。操作前用酒精擦拭超凈臺(tái)面及雙手。手或相對(duì)較臟的物品不能經(jīng)過(guò)開(kāi)放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時(shí)如吸管尖碰到瓶口，則應(yīng)將吸管丟掉。
2.做無(wú)菌技術(shù)操作時(shí)要注意什么?
無(wú)菌操作同樣是護(hù)士最基礎(chǔ)，最常用，最能體現(xiàn)護(hù)士專(zhuān)業(yè)水平的一項(xiàng)技術(shù)操作。
臨床護(hù)士在做任何的一項(xiàng)操作時(shí)，都能涉及到此項(xiàng)技術(shù)，所以說(shuō)它是最基礎(chǔ)最常用的一項(xiàng)技術(shù)操作。無(wú)菌技術(shù)還涵蓋了下列操作內(nèi)容：無(wú)菌鉗、無(wú)菌包、無(wú)菌盤(pán)、無(wú)菌手套等。
這幾項(xiàng)操作有一定的難度，需要經(jīng)過(guò)刻苦的練習(xí)才能全面掌握。無(wú)菌技術(shù)操作要注意如下幾點(diǎn)：（1） 凡是污染的物品，必須重新滅菌后方可使用。
（2） 取出的無(wú)菌物品未用，也不可再放回?zé)o菌容器內(nèi)。（3 ）無(wú)菌鉗及容器每周消毒二次。
（4） 已打開(kāi)的無(wú)菌包必須注明開(kāi)包日期和時(shí)間，保存時(shí)間為二十四小時(shí)。（5 ）無(wú)菌治療盤(pán)使用時(shí)間不得超過(guò)四小時(shí)。
（6） 無(wú)菌操作時(shí)，不可穿越無(wú)菌區(qū)。（7） 無(wú)菌手套一旦發(fā)現(xiàn)破損，必須立即更換。
（8） —套無(wú)菌物品，只能一個(gè)病人使用，不能二人共同使用。
3.進(jìn)行無(wú)菌操作前應(yīng)
培養(yǎng)基的制作注意事項(xiàng)：1 注意營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度比和c/n比2 控制ph條件3 原料來(lái)源的選擇4 滅菌處理無(wú)菌操作注意事項(xiàng)：1。
實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)（laminar flow） 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每 次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間 污染。
實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間 隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。
2。 無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可 以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。
實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦 拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域，勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操 作。
3。 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。
勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打 開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。 容器打開(kāi)后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用， 盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4。 工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
對(duì)于來(lái)自人類(lèi)或是病毒 感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)（至少class ii）。 操作過(guò)程 中，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如dmso 及tpa 等，并避免尖銳 針頭之傷害等。
5。 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目： 5。
1。 co2 鋼瓶之co2 壓力 5。
2。 co2 培養(yǎng)箱之co2 濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染（水盤(pán)的水用無(wú)菌水，每周更換）。
5。3。
無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線燈管及hepa 過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300 小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/hepa）。 6。
水槽可添加消毒劑（zephrin 1:750），定期更換水槽的水。
4.誰(shuí)能告訴我無(wú)菌操作的具體注意事項(xiàng)
無(wú)菌技術(shù)：在執(zhí)行醫(yī)療護(hù)理抄作過(guò)程中，防止一切微生物侵入肌體和保持無(wú)菌物品及無(wú)菌區(qū)域不被污染的操作方法和管理方法。
無(wú)菌技術(shù)操作原則：一是環(huán)境要清潔；二是進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí)，衣帽穿戴要整潔，口罩須著住口鼻。
現(xiàn)在有人說(shuō)：無(wú)菌操作沒(méi)有20分鐘就可以不戴口罩。這樣行嗎？什么是無(wú)菌技術(shù)和無(wú)菌技術(shù)操作？規(guī)章制度就得嚴(yán)格執(zhí)行，沒(méi)有規(guī)矩就不成方圓！我就親眼看見(jiàn)對(duì)藥時(shí)不戴口罩，邊講話邊抽藥，注意力未集中，把藥給配錯(cuò)了。
護(hù)士，儀表端莊，衣帽整潔；無(wú)菌操作時(shí)該戴口罩，該用無(wú)菌手套，正規(guī)操作，一絲不茍。自己放心，病人放心。
5.無(wú)菌技術(shù)操作的基本要求有哪些
無(wú)菌技術(shù)操作的基本要求：
1、操作前準(zhǔn)備
操作環(huán)境應(yīng)清潔、寬敞、定期消毒；物品布局合理；無(wú)菌操作前半小時(shí)應(yīng)停止清掃工作、減少走動(dòng)、避免塵土飛揚(yáng)；工作人員應(yīng)做好個(gè)人準(zhǔn)備，戴好帽子、口罩，修剪指甲并洗手，必要時(shí)穿無(wú)菌衣、帶無(wú)菌手套。
2、操作中保持無(wú)菌
工作人員應(yīng)面向無(wú)菌區(qū)，手臂應(yīng)保持在腰部或操作臺(tái)臺(tái)面以上，不可跨越無(wú)菌區(qū)避免面對(duì)無(wú)菌區(qū)談笑、咳嗽、打噴嚏；
用無(wú)菌持物鑷取用物品。無(wú)菌物品一經(jīng)取出，即使未用，也不可放回?zé)o菌容器內(nèi)。一套無(wú)菌物品僅供一位患者使用，避免交叉感染；無(wú)菌操作中，無(wú)菌物品疑有污染或已被污染，應(yīng)予更換并重新滅菌。
3、無(wú)菌物品保管
無(wú)菌物品必須與非無(wú)菌物品分開(kāi)放置；無(wú)菌物品不可暴露于空氣中，應(yīng)存放于無(wú)菌包或無(wú)菌容器中，無(wú)菌包外須標(biāo)明物品名稱、滅菌日期，并按失效期先后順序排放。
定期檢查無(wú)菌物品的滅菌日期及保存情況。無(wú)菌包在未被污染的情況下保存期一般為7天，過(guò)期或受潮應(yīng)重新滅菌。
擴(kuò)展資料：
無(wú)菌技術(shù)操作目的：
取用、放置、保存無(wú)菌物品符合無(wú)菌操作原則，保證無(wú)菌物品和無(wú)菌區(qū)域不被污染。防止病原微生物侵入或傳播給他人。
適用領(lǐng)域：
進(jìn)行微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、外科手術(shù)、換藥、注射時(shí)，均需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)定。
參考資料來(lái)源：搜狗百科——無(wú)菌技術(shù)
6.培養(yǎng)基的制作及無(wú)菌操作技術(shù)常見(jiàn)的注意事項(xiàng)
培養(yǎng)基的制作注意事項(xiàng)：
1 注意營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度比和C/N比
2 控制pH條件
3 原料來(lái)源的選擇
4 滅菌處理
無(wú)菌操作注意事項(xiàng)：
1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)（laminar flow） 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 %
ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每
次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間
污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間
隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。
2. 無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可
以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦
拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域，勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操
作。
3. 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打
開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用，
盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類(lèi)或是病毒
感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)（至少Class II）。操作過(guò)程
中，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳
針頭之傷害等。
5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：
5.1. CO2 鋼瓶之CO2 壓力
5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2 濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染（水盤(pán)的水用無(wú)菌水，每周更換）。
5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300
小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/HEPA）。
6. 水槽可添加消毒劑（Zephrin 1:750），定期更換水槽的水
